[发明专利]免疫磁分离结合实时荧光定量PCR的检测方法及其在食源性致病菌快速检测中的应用在审
申请号: | 202211718593.6 | 申请日: | 2022-12-29 |
公开(公告)号: | CN115932259A | 公开(公告)日: | 2023-04-07 |
发明(设计)人: | 张小凤 | 申请(专利权)人: | 南京北极光质检技术服务有限公司 |
主分类号: | G01N33/569 | 分类号: | G01N33/569;G01N33/543;C12Q1/06;C12Q1/689;C12Q1/6851;C12R1/445 |
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地址: | 210000 江苏省南京市栖霞区*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 免疫 分离 结合 实时 荧光 定量 pcr 检测 方法 及其 食源性 致病菌 快速 中的 应用 | ||
1.一种免疫磁分离结合实时荧光定量PCR的检测方法,其特征在于,包括:
(1)免疫磁珠制备:用无菌PBS洗涤羧化MNPs,然后在含有EDC和NHSS的无菌PBS中,以激活羧基去除多余的活化试剂;将PEI加入活化MNPs中,偶联;去除多余PEI;清洗并再次悬浮PBS中;
(2)将菌液与PEI-MNPs混合,孵育,形成细菌-PEI-MNPs复合物;
(3)然后将上清液和细菌-PEI-MNPs复合物分别在相应平板上培养,进行细菌计数;
(4)目的基因提取后,采用实时荧光定量PCR。
2.根据权利要求1的方法,其特征在于,羧化MNPs浓度为10mg/mL。
3.根据权利要求1的方法,其特征在于,偶联时间为1-2h。
4.根据权利要求1的方法,其特征在于,孵育条件为37℃孵育30min。
5.根据权利要求1的方法,其特征在于,采用外部磁场去除多余PEI。
6.一种免疫磁分离结合实时荧光定量PCR的检测方法在食源性致病菌快速检测中的应用,采用权利要求1-5之一的方法,菌液是采样的液体;或采样后稀释的液体;或采样后进行培养得到的液体。
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