[发明专利]一种用于石蜡包埋组织样本FISH检测的前处理液及其应用

说明书

本发明公开了一种用于石蜡包埋组织样本FISH检测的前处理液及其应用。所述前处理液含有保护液和透明剂，所述保护液含有乙二胺四乙酸、碱性金属氯化物和缓冲液，所述透明剂含有叔丁醇、聚乙二醇或表面活性剂中任意一种或至少两种的组合。本发明开发全新的前处理液配方，利用各组分协同配合，能够有效针对制作时间在3年以上的陈旧石蜡包埋组织样本，促进FISH探针进入细胞核，减少组织脱落，并有效杂交，降低荧光背景，有利于FISH信号观察，可有效应用于对陈旧样本进行回溯研究或是对复发病人的首次石蜡包埋组织样本进行研究等。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种用于石蜡包埋组织样本FISH检测的前处理液及其应用。

背景技术

常规石蜡包埋组织切片(Formalin-fixedparaffin-embedding，FFPE)是组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法，包括：(1)固定组织：将标本放在福尔马林溶液中；(2)石蜡包埋：在福尔马林固定之后，组织标本包埋在石蜡中。在病理学中常用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化。福尔马林固定石蜡包埋组织是病理科最常用的样本保存方式，该方式所保存的样本稳定，且保存条件简便，可在医院档案中保存数年至数十年，是对临床标本回溯的最佳材料。但随着样本保存时间的延长，样本的核酸和蛋白质仍旧逐渐降解，且交联程度逐渐加深。

荧光原位杂交技术(Fluorescence In Situ Hybridization，FISH)是一种可直接在细胞水平上研究基因变化的临床应用方法，与FISH方法结合可用于细胞中基因定位和状态分析，是在细胞遗传学同DNA技术相结合的基础上产生的一种在诊断遗传性疾病和恶性肿瘤方面都具有十分重要价值的技术。FISH探针制备工艺包括：缺口平移、随机引物标记、RNA转录标记、PCR标记等方法。标记后的探针在杂交缓冲液的辅助下，于合适的温度与染色体进行变性和退火杂交，再用合适的缓冲液洗去多余的探针，加入4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)或Hochest33285等细胞核染色液进行非特异的DNA染色，封片后可在镜下观察。

在肿瘤相关的鉴别诊断技术当中，FFPE样本是大部分实体肿瘤常见的样本形式，在临床实践中，制作超过3年的样本，因缓慢而持续的甲醛固定，碎片化严重，在制片过程中核酸容易脱落，影响实验结果，杂交信号弱，不利于FISH信号观察，几乎不能用于FISH技术检测，使得FISH技术无法对陈旧样本进行回溯研究或是对复发病人的首次FFPE样本进行研究，因此开发可用于陈旧FFPE样本FISH检测的前处理方法成为人们关注的重点，CN105018598A公开了一种FFPE样本的FISH预处理方法以及预处理液，该预处理液包括：预处理液I：EDTA溶液、柠檬酸缓冲液、硫氰酸钠溶液中的至少一种；预处理液II：浓度0.01-0.5％滂胺天蓝、浓度0.025-1％台盼蓝中的至少一种；预处理液III：浓度0.1-5％硼氢化钠，但上述方法仍难以有效针对陈旧FFPE样本。

综上所述，开发可用于陈旧FFPE样本FISH检测的前处理液及方法，对于FISH领域具有重要意义。

发明内容

针对现有技术的不足和实际需求，本发明提供一种用于石蜡包埋组织样本FISH检测的前处理液及其应用，能够有效针对3年以上陈旧石蜡包埋组织样本进行前处理，使得处理后样本能够有效进行FISH检测。

为达上述目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供一种用于石蜡包埋组织样本FISH检测的前处理液，所述前处理液含有保护液和透明剂，所述保护液含有乙二胺四乙酸(EDTA)、碱性金属氯化物和缓冲液，所述透明剂含有叔丁醇、聚乙二醇或表面活性剂中任意一种或至少两种的组合。