[发明专利]一种重组蛋白及其制备方法和在牛结核病检测中的应用在审
| 申请号： | 202211719477.6 | 申请日： | 2022-12-30 |
| 公开（公告）号： | CN116284439A | 公开（公告）日： | 2023-06-23 |
| 发明（设计）人： | 杨中兴;郑可;鲍佳鹏;周红霞;陈彪;王翠然;张玲玲;刘梦珂;李彦芬;王振华 | 申请（专利权）人： | 河北新世纪药业有限公司 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/22;C12N15/62;C12N15/70;G01N33/569 |
| 代理公司： | 石家庄领皓专利代理有限公司 13130 | 代理人： | 吴瑾 |
| 地址： | 050000 河北*** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 重组 蛋白 及其 制备 方法 结核病 检测 中的 应用 | ||
1.一种重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.根据权利要求1所述的一种重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白包括串联组合的ESAT-6、CFP-10和BFH。
3. 根据权利要求2所述的一种重组蛋白，其特征在于，所述ESAT-6的氨基酸序列如SEQID NO.3所示，所述CFP-10的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述BFH的氨基酸序列SEQ IDNO.5所示。
4. 根据权利要求2所述的一种重组蛋白，其特征在于，所述ESAT-6、CFP-10和BFH用Linker按照ESAT-6-CFP-10-BFH的方式串联组合，所述Linker的氨基酸序列SEQ ID NO.6所示。
5. 一种编码权利要求1所述重组蛋白的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
6.权利要求1-4任意一项所述重组蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）分别将ESAT-6、CFP-10和BFH的氨基酸序列进行密码子优化；
（2）用Linker按照ESAT-6-CFP-10-BFH的方式将优化后的ESAT-6、CFP-10和BFH串联组合，得到合成基因EC-BFH；
（3）将合成基因EC-BFH插入原核表达载体pET 28a，得到EC-BFH表达载体；
（4）将EC-BFH表达载体转入蛋白表达菌株，表达、纯化后得到重组蛋白。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述纯化时采用尿素变性和复性。
8.权利要求1所述重组蛋白在制备检测或诊断牛结核病试剂中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述检测或诊断牛结核病试剂包括所述重组蛋白，还包括低分子量透明质酸。
10.权利要求1所述重组蛋白在制备牛结核病检测试剂盒中的应用。
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