[发明专利]一种精子DNA提取试剂盒及提取方法

权利要求书

1.一种精子DNA提取试剂盒，其特征在于，包括裂解液，所述裂解液中包括0.9～2.5％的SDS、0.156～0.267M的DTT，0.19～0.21mg/mL的蛋白酶和5～12ng/μL的RNase A。

2.根据权利要求1所述的精子DNA提取试剂盒，其特征在于，所述裂解液中包括1.5％的SDS、0.2M的DTT，0.2mg/mL的蛋白酶和10ng/μL的RNase A。

3.根据权利要求1所述的精子DNA提取试剂盒，其特征在于，还包括漂洗液和洗脱液。

4.根据权利要求2所述的精子DNA提取试剂盒，其特征在于，所述漂洗液为有机醇溶液。

5.根据权利要求2所述的精子DNA提取试剂盒，其特征在于，所述洗脱液选自TE缓冲液、Tris-HCl缓冲液和水。

6.利用权利要求1所述精子DNA提取试剂盒提取精子DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1，将精液冻存样本进行融化，取200μL于2mL离心管，32℃～41℃水浴锅中孵育20～35min，至溶液不粘稠，280～350×g离心至产生沉淀，吸弃上清溶液，

保留沉淀；

S3，向沉淀中加入所述裂解液，55℃～60℃金属浴中孵育2.5～4h，再在70℃孵育15～25min；

S3，向上清液中加入0.6×体积氯仿，颠倒混匀样本或于涡旋仪上涡旋混匀样本，

直至溶液完全乳化成白色；

S4，12000～14000×g，室温离心8～15min，吸取800μL上清液转移至新的1.5mL离心管中；

S5，向步骤S4中新的1.5mL离心管中加入0.6×体积混合均匀的磁珠，用移液器轻轻吹打混匀10次以上，室温静置3～8min；

S6，将离心管置于磁力架上静置3～8min，直至溶液澄清，吸弃上清；

S7，保持离心管在磁力架上，加入200μL所述漂洗液，室温静置20～40s后，吸弃上清；

S8，瞬时离心，保持1.5mL离心管固定于磁力架上，吸弃漂洗液，室温干燥磁珠3～8min；

S9，将离心管从磁力架上取下，加入100μL所述洗脱液，用移液器轻轻吹打混匀，室温静置3～8min；

S10，将1.5mL离心管置于磁力架上，室温静置3～8min至溶液澄清，小心吸取上清液转移到对应的新的样本保存管中，得到含有精子DNA的溶液。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，在步骤S8之前，重复一遍步骤S7。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于，所述精液来自猪、牛、羊或狗。