[发明专利]一种精子DNA提取试剂盒及提取方法

说明书

本发明公开了一种精子DNA提取试剂盒及提取方法，属于分子生物学技术领域。其中，所述提取试剂盒包括裂解液，所述裂解液中包括0.9～2.5％的SDS、0.156～0.267M的DTT，0.19～0.21mg/mL的蛋白酶和5～12ng/μL的RNase A。利用本发明的试剂盒和方法提取精子DNA，得到的DNA总量高、琼脂糖凝胶检测主条带完整、纯度高，能够用于研究精子来源物种的遗传特性，为分子育种提供技术支持。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体地，涉及一种精子DNA提取试剂盒及提取方法。

背景技术

近年来，我国种业存在一定的结构性失衡，农作物育种相对领先，在多个领域与国际先进水平持平或差距较小，而畜牧业育种则相对落后，同时，不同畜种育种发展水平也存在不平衡。例如，我国商品猪种源大约八成依赖进口；国外奶牛种公牛冻精产品占我国冻精产品市场的50％以上。所以在建设种业强国的过程中，必须尽力补齐畜禽种业这块短板。

基因组DNA是动物遗传物质的主要载体，其在基因工程、环境检测、环境净化、农业、畜牧业、食品业、药品和基因治疗等领域都有广泛的应用。随着分子生物学和分子育种的发展，基因组DNA的提取与保存成为动物科学实验和育种生产过程中越来越重要的内容。

然而，常规的基因组DNA提取方法或DNA提取试剂盒无法获得高质量的精子DNA，导致精子DNA在消化中释放困难、抽提产率低、纯度低，难以满足高要求的分子生物学。

发明内容

为了解决上述技术问题中的至少一个，本发明采用的技术方案如下：

本发明第一方面提供一种精子DNA提取试剂盒，包括裂解液，所述裂解液中包括0.9～2.5％的SDS、0.156～0.267M的DTT，0.19～0.21mg/mL的蛋白酶和5～12ng/μL的RNaseA。

在本发明的一些具体实施方案中，所述裂解液中包括1.5％的SDS、0.2M的DTT，0.2mg/mL的蛋白酶和10ng/μL的RNase A。

在本发明的一些实施方案中，所述试剂盒还包括漂洗液和洗脱液。

在本发明的一些具体实施方案中，所述漂洗液为有机醇溶液，例如乙醇、丁醇等。在本发明的一些优选实施方案中，所述漂洗液为80％乙醇。

在本发明的一些具体实施方案中，所述洗脱液选自TE缓冲液、Tris-HCl缓冲液和水。在本发明的一些具体实施方案中，所述洗脱液为pH＝8.0的Tris-HCl。

本发明第二方面提供利用本发明第一方面所述精子DNA提取试剂盒提取精子DNA的方法，包括以下步骤：

S1，将精液冻存样本进行融化，取200μL于2mL离心管，32℃～41℃水浴锅中孵育20～35min，至溶液不粘稠，280～350×g离心至产生沉淀，吸弃上清溶液，保留沉淀；

S2，向沉淀中加入所述裂解液，55℃～60℃金属浴中孵育2.5～4h，再在70℃孵育15～25min；

S3，向上清液中加入0.6×体积氯仿，颠倒混匀样本或于涡旋仪上涡旋混匀样本，直至溶液完全乳化成白色；

S4，12000～14000×g，室温离心8～15min，吸取800μL上清液转移至新的1.5mL离心管中；

S5，向步骤S4中新的1.5mL离心管中加入0.6×体积混合均匀的磁珠，用移液器轻轻吹打混匀10次以上，室温静置3～8min；

S6，将离心管置于磁力架上静置3～8min，直至溶液澄清，吸弃上清；

S7，保持离心管在磁力架上，加入200μL所述漂洗液，室温静置20～40s后，吸弃上清；