[发明专利]重组酶介导的全冻干恒温扩增体系及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 202211720270.0 | 申请日： | 2022-12-30 |
| 公开（公告）号： | CN115948515A | 公开（公告）日： | 2023-04-11 |
| 发明（设计）人： | 丁平慧;曹昶政;纪博知;刘佳;戴立忠 | 申请（专利权）人： | 圣湘生物科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6844 | 分类号： | C12Q1/6844;C12Q1/70;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京精金石知识产权代理有限公司 11470 | 代理人： | 尉月丽 |
| 地址： | 410205 湖南省长沙*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 重组 酶介导 全冻干 恒温 扩增 体系 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种全冻干恒温扩增体系，其特征在于：包括两部分：
第一部分为酶体系；第二部分为引物探针和激活体系；所述酶体系的冻干形式为冻干粉；所述引物探针和激活体系的冻干形式为冻干球。
2.根据权利要求1所述的全冻干恒温扩增体系，其特征在于：所述的酶体系包括蛋白酶混合液、dNTPs、Tris缓冲buffer、激酶体系、甘露糖基甘油酸；所述的激活体系包括聚乙二醇、海藻糖、二硫苏糖醇、乙酸镁或乙酸钾、氯化钠。
3.根据权利要求2所述的全冻干恒温扩增体系，其特征在于：所述的蛋白酶混合液包括重组酶、重组调节蛋白、单链DNA结合蛋白、链置换DNA聚合酶和RT酶；所述的激酶体系包括ATP、磷酸肌酸激酶和磷酸肌酸。
4.根据权利要求1所述的全冻干恒温扩增体系，其特征在于：所述引物浓度为100-800nM；所述的探针浓度为50-200nM。
5.根据权利要求2所述的全冻干恒温扩增体系，其特征在于：所述的酶体系包括蛋白酶混合液、10-60mM dNTPs、10-80mM Tris缓冲buffer、激酶体系、1-5mM甘露糖基甘油酸。
6.根据权利要求2所述的全冻干恒温扩增体系，其特征在于：所述的激活体系包括1％-20％聚乙二醇、2％-10％海藻糖、1-15mM二硫苏糖醇、2-28mM乙酸镁、1-12mM氯化钠。
7.根据权利要求3所述的全冻干恒温扩增体系，其特征在于：所述的蛋白酶混合液包括100-800ng/μL重组酶、200-800ng/μL重组调节蛋白、300-1000ng/μL单链DNA结合蛋白、20-100ng/μL链置换DNA聚合酶和160-200U RT酶；所述的激酶体系包括1-10mM ATP、40-200ng/μL磷酸肌酸激酶和20-80mM磷酸肌酸。
8.一种全冻干恒温扩增试剂盒，其特征在于：包括权利要求1-7任一项所述的全冻干恒温扩增体系。
9.一种全冻干恒温扩增体系的制备方法，其特征在于：权利要求1-7任一项所述的酶体系通过冷冻冻干处理后得到酶体系冻干粉，所述的引物探针和激活体系混合后通过冷冻冻干处理后得到冻干球。
10.权利要求1-7任一项所述的全冻干恒温扩增体系在重组酶聚合酶扩增中的应用。
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