[发明专利]一种简便的可视化快速核酸检测方法及其应用在审
| 申请号： | 202211722460.6 | 申请日： | 2022-12-30 |
| 公开（公告）号： | CN116218960A | 公开（公告）日： | 2023-06-06 |
| 发明（设计）人： | 蒋玮;吴潇;白蓝;何川;陈一帆;贾军伟 | 申请（专利权）人： | 上海市农业科学院 |
| 主分类号： | C12Q1/682 | 分类号： | C12Q1/682;C12Q1/689;C12R1/19 |
| 代理公司： | 上海开祺知识产权代理有限公司 31114 | 代理人： | 费开逵 |
| 地址： | 201106 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 简便 可视化 快速 核酸 检测 方法 及其 应用 | ||
1.一种简便的可视化快速核酸检测方法，其特征在于，所述可视化快速核酸检测方法采用以下检测体系，包括：
(1)PMNT，或者与PMNT相似的和单链核酸混合会发生颜色变化的聚合物；
(2)Cas12a蛋白，所述Cas12a蛋白是Cas12a或者具有与Cas12a类似的反式单链DNA切割活性的Cas蛋白；
(3)crRNA，所述crRNA引导Cas12a蛋白特异性与靶标核酸分子结合；
(4)报告分子，所述报告分子是ssDNA分子，可与PMNT结合，使溶液显现红色，当所述报告分子被所述Cas12a蛋白反式切割后，使溶液呈现黄色；
其中，将待测样本加入所述检测体系中，通过溶液在自然光下的颜色变化实现一种可视化快速核酸检测：当报告分子被Cas12a蛋白切割，溶液呈现黄色，表示所述待测样本中存在对应的靶标核酸分子；当报告分子不被Cas12a蛋白切割，溶液呈现红色，则表示所述待测样本中不存在对应的靶标核酸分子。
2.根据权利要求1所述的可视化快速核酸检测方法，其特征在于，所述与PMNT相似的和单链核酸混合会发生颜色变化的聚合物为聚(9,9-二正辛基芴基-2,7-二基)。
3.根据权利要求1所述的可视化快速核酸检测方法，其特征在于，所述ssDNA分子的结构为Nm，其中，N代表选自A、T、C、G的任一碱基；m为14～18的正整数。
4.根据权利要求1所述的可视化快速核酸检测方法，其特征在于，在所述检测体系中，ssDNA分子的浓度为1～10μM。
5.根据权利要求4所述的可视化快速核酸检测方法，其特征在于，在所述检测体系中，ssDNA分子的浓度为2.5～5μM。
6.根据权利要求1所述的可视化快速核酸检测方法，其特征在于，在所述检测体系中，所述PMNT的浓度为25～100μM。
7.根据权利要求6所述的可视化快速核酸检测方法，其特征在于，在所述检测体系中，所述PMNT的浓度为50～100μM。
8.根据权利要求1所述的可视化快速核酸检测方法，其特征在于，采用30μL检测体系，其组成为：1X NEBuffer，30nM crRNA，30nM EnGen Lba Cas12a，1.3U/μL RNaseinhibitor，1～10μM ssDNA-15nt，30nM待测DNA，25～100μMPMNT。
9.一种根据权利要求1～8中任意一项所述的简便的可视化快速核酸检测方法的应用，其特征在于，包括在环境监控、食品安全、医疗、动植物传染病防控领域中的应用。
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