[发明专利]一种用于优化遗传毒理染色体畸变试验的细胞处理方法在审
| 申请号： | 202211722970.3 | 申请日： | 2022-12-30 |
| 公开（公告）号： | CN116399673A | 公开（公告）日： | 2023-07-07 |
| 发明（设计）人： | 单翔;乐聪;徐宁;康明珠;陈瑶瑶;高立文 | 申请（专利权）人： | 苏州药明康德新药开发有限公司 |
| 主分类号： | G01N1/30 | 分类号： | G01N1/30;G01N1/28 |
| 代理公司： | 上海市汇业律师事务所 31325 | 代理人： | 王函 |
| 地址： | 215168 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 优化 遗传 染色体 畸变 试验 细胞 处理 方法 | ||
1.一种用于优化遗传毒理染色体畸变试验的细胞处理方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一、将低渗液加入重悬细胞中，进行一次孵育；
步骤二、向一次孵育后的细胞中加入固定液，进行二次孵育；
步骤三、将二次孵育后的细胞制片，将细胞玻片浸入1～20％的染色液中1～20min，即可。
2.根据权利要求1所述的用于优化遗传毒理染色体畸变试验的细胞处理方法，其特征在于：包括如下步骤：
步骤一、将低渗液加入重悬细胞中进行一次孵育，一次孵育时至少进行一次混悬操作；
步骤二、向一次孵育后的细胞中加入固定液，离心得到重悬细胞；再加入固定液，进行二次孵育；
步骤三、将二次孵育后的细胞制片，将细胞玻片浸入1～20％的染色液中1～20min，即可。
3.根据权利要求1或2所述的用于优化遗传毒理染色体畸变试验的细胞处理方法，其特征在于：所述步骤一中重悬细胞的制备过程为：将细胞吹打分散，细胞筛过滤，离心，即得。
4.根据权利要求1或2所述的用于优化遗传毒理染色体畸变试验的细胞处理方法，其特征在于：所述步骤一中低渗液的温度为30～40℃，所述一次孵育的孵育温度为35～40℃，所述一次孵育的孵育时间为5～40min；
所述步骤二中固定液的温度为-4～10℃，所述二次孵育的孵育温度为35～40℃，所述二次孵育的孵育时间为5～40min。
5.根据权利要求1或2所述的用于优化遗传毒理染色体畸变试验的细胞处理方法，其特征在于：所述步骤一中低渗液的温度为35～38℃，所述一次孵育的孵育温度为36～38℃，所述一次孵育的孵育时间为20～30min；
所述步骤二中固定液的温度为-2～4℃，所述二次孵育的孵育温度为36～38℃，所述二次孵育的孵育时间为20～30min。
6.根据权利要求1或2所述的用于优化遗传毒理染色体畸变试验的细胞处理方法，其特征在于：所述步骤二中固定液为甲醇和冰醋酸的混合溶液；
所述步骤三的染色液为姬姆萨染色液。
7.根据权利要求6所述的用于优化遗传毒理染色体畸变试验的细胞处理方法，其特征在于：所述固定液中为甲醇与冰醋酸的体积比为(0.1～10):1；
所述染色液为5～15％的姬姆萨染色液，所述染色液的染色时间为5～15min。
8.根据权利要求7所述的用于优化遗传毒理染色体畸变试验的细胞处理方法，其特征在于：所述固定液中为甲醇与冰醋酸的体积比为(1～5):1；
所述染色液为5～10％的姬姆萨染色液，所述染色液的染色时间为5～10min。
9.根据权利要求1或2所述的用于优化遗传毒理染色体畸变试验的细胞处理方法，其特征在于：所述步骤三中细胞制片的过程为：将二次孵育的细胞离心去除上清液，再加入固定液，离心去除上清液制得细胞悬液，将细胞悬液滴至载玻片，即得。
10.根据权利要求1或2所述的用于优化遗传毒理染色体畸变试验的细胞处理方法，其特征在于：所述细胞为骨髓细胞。
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