[发明专利]一种用于优化遗传毒理染色体畸变试验的细胞处理方法

说明书

本发明涉及细胞生物学技术领域，特别是涉及一种用于优化遗传毒理染色体畸变试验的细胞处理方法，包括：将低渗液加入重悬细胞中，进行一次孵育；向一次孵育后的细胞中加入固定液，进行二次孵育；将二次孵育后的细胞制片，将细胞玻片浸入1～20％的染色液中1～20min，即可。本发明的细胞处理方法优化了低渗条件，提高低渗效率；优化染色效果，提高玻片质量进一步提升阅片效率。经此细胞处理方法染色的玻片，染色均匀，深浅适宜，既能很好的评估畸变率，也能更快的阅片。

技术领域

本发明涉及细胞生物学技术领域，特别是涉及一种用于优化遗传毒理染色体畸变试验的细胞处理方法。

背景技术

啮齿类动物骨髓细胞染色体畸变试验，出现较早，在上个世纪70-80年代，广泛用于评估化合物的系统遗传毒性。但因其操作复杂，程序繁琐，阅片时间长等问题，逐渐被红细胞微核试验所取代。但当化合物可引起如体温变化、应激、诱导红细胞生成改变等情况下，化合物可诱导机体产生非遗传毒性机制造成的微核升高。此时，可用该染色体畸变试验作为体内遗传毒理试验评估化合物的遗传毒性。

骨髓细胞染色体畸变试验作为经典的遗传毒理试验，根据一些文献报道，其染色效果和中期相染色体的呈现形态并不好，严重影响畸变率的评估，同时大大的影响了阅片的进度。急需一种方法来优化细胞的处理和制备的过程。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种用于优化遗传毒理染色体畸变试验的细胞处理方法，用于解决现有技术中遗传毒理试验中染色体畸变情况不易观察的问题。本发明的细胞处理方法优化了低渗条件，提高低渗效率；优化染色效果，提高玻片质量进一步提升阅片效率。经此细胞处理方法染色的玻片，染色均匀，深浅适宜，既能很好的评估畸变率，也能更快的阅片。

为实现上述目的及其他相关目的，

本发明的第一方面，提供一种用于优化遗传毒理染色体畸变试验的细胞处理方法，包括如下步骤：

步骤一、将低渗液加入重悬细胞中，进行一次孵育；

步骤二、向一次孵育后的细胞中加入固定液，进行二次孵育；

步骤三、将二次孵育后的细胞制片，将细胞玻片浸入1～20％的染色液中1～20min，即可。

经低渗液一次孵育、固定液二次孵育处理后的细胞，可保证有足够数目的细胞充分吸涨，以保证有足够多的中期相细胞可用于阅片和评估。在染色过程中，优化染色液的浓度，经此方法染色的玻片，染色均匀，深浅适宜。

于本发明的一实施例中，包括如下步骤：

步骤一、将低渗液加入重悬细胞中进行一次孵育，一次孵育时至少进行一次混悬操作；

步骤二、向一次孵育后的细胞中加入固定液，离心得到重悬细胞；再加入固定液，进行二次孵育；

步骤三、将二次孵育后的细胞制片，将细胞玻片浸入1～20％的染色液中1～20min，染色完成后采用纯水浸泡1～3次，即可。

在一次孵育过程中，在低渗过程中增加了混悬操作(手动旋转、摇晃混匀的操作)，使得管内细胞能充分与低渗液接触，提高低渗效率。

在染色过程中，优化染色液的浓度，经此方法染色的玻片，染色均匀，深浅适宜。在细胞染色完成后，通过纯水多次洗涤，更便于后期观察。

于本发明的一实施例中，所述步骤一中重悬细胞的制备过程为：将细胞吹打分散，细胞筛过滤，离心，即得。

一般而言，细胞筛的粒径不能小于40微米。

细胞吹打分散后，增加使用细胞筛以过滤杂质、碎片及细胞团块。