[发明专利]一种高密度发酵工业化生产枯草三十七肽的方法

权利要求书

1.一种高密度发酵工业化生产枯草三十七肽的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：将枯草三十七肽的发酵菌种枯草芽孢杆菌经复壮活化、一级种子、二级种子、30 L种子罐、3 m³种子罐、30 m³发酵罐发酵、在30 m³发酵过程中添加补料、放罐：

（1）枯草芽孢杆菌的活化：从-80 ℃取出枯草芽孢杆菌菌种，复温后，采用划线接种到营养肉汤琼脂平板上，35 ℃培养12小时；

（2）一级种子：从平板上，挑取单个菌落，接种于一级种子培养基中，装量30 mL/150mL，于180 r/min摇床中37℃培养6～8 h，测定发酵液的OD值，达到1.6～1.8后，得到一级种子液；

（3）二级种子：从一级种子液中，分别吸取1mL，接种于两个二级种子培养基中，装量100 mL/500 mL，于220 r/min摇床中37℃培养5～7 h，测定发酵液的OD值，达到1.7～2.0后，得到二级种子液；

（4）30 L种子罐：把二级种子液按1 %的接种量接种到装有15 L的种子培养基的30 L种子罐中，以160 r/min、罐压0.05 MP a，通风量1：1，发酵5～7 h，测定发酵液的OD值达3.2～3.6后，得到30 L种子罐液；

（5）3 m³种子罐：把30 L种子罐液按1 %的接种量接种到装有1.5 m³的种子培养基的3m³种子罐中，以160 r/min、罐压0.05MP a,通风量1：1，发酵5～7 h，测定发酵液的OD值达3.5～4.0后，得到产枯草三十七肽的枯草芽孢杆菌种子液；

（6）在30 m³发酵过程中流加补料：在其30 m³发酵过程中根据发酵液的OD值与枯草三十七肽的含量变化流加补料；

（7）放罐：放罐时间的确定依据为，发酵32 h后，每0.5 h监测一次枯草三十七肽含量，两次枯草三十七肽含量增量小于50 mg/L时，立刻放罐，停止发酵，得到枯草三十七肽发酵液。

2.如权利要求1所述的高密度发酵工业化生产枯草三十七肽的方法，其特征在于，所述菌种活化培养基配方为牛肉膏2 g，酵母膏2 g，蛋白胨10 g，N aCl 5 g，琼脂15 g，加水定容至 1000 mL调pH为7.4；

一级种子培养基配方、二级种子培养基配方均为牛肉膏2 g，酵母膏 2 g，蛋白胨10 g，N aCl 5 g，琼脂15 g，加水定容至1000 mL调pH为7.4；

30 L种子罐、3 m³培养基配方均为酵母浸膏13 g/L，蛋白胨10 g/L，水溶性玉米淀粉4g/L，玉米浆8 g/L，葡萄糖5 g/L，磷酸氢二钾1.5 g/L，氯化钠2 g/L，硫酸镁 0.5 g/L，其余为饮用水。

3.如权利要求1所述的高密度发酵工业化生产枯草三十七肽的方法，其特征在于，所述30 m³发酵培养基中酵母浸膏浓度为5～10 g/L，葡萄糖浓度为0.2～2 g/L，水溶性玉米淀粉浓度为2～10 g/L，玉米浆浓度为8～20 g/L，氯化铵浓度为1～2 g/L，氯化钠浓度为1～3g/L，消泡剂浓度为2～5 g/L，其余为饮用水；

所述补料包含葡萄糖浓度为5～15 g/L，玉米浆浓度为4～15 g/L，其余为饮用水。

4.如权利要求1所述的高密度发酵工业化生产枯草三十七肽的方法，其特征在于，所述培养基加入发酵罐中的消杀时间为8～12 min。