[发明专利]SA重组蛋白的纯化方法在审
申请号: | 202211734034.4 | 申请日: | 2022-12-30 |
公开(公告)号: | CN115925837A | 公开(公告)日: | 2023-04-07 |
发明(设计)人: | 许行尚;杰弗瑞·陈;王鹏 | 申请(专利权)人: | 南京岚煜生物科技有限公司;江苏华控生物科技有限公司 |
主分类号: | C07K14/36 | 分类号: | C07K14/36;C07K1/34;C07K1/22;C07K1/36 |
代理公司: | 南京北辰联和知识产权代理有限公司 32350 | 代理人: | 陆中丹 |
地址: | 210000 江苏*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | sa 重组 蛋白 纯化 方法 | ||
1.一种SA重组蛋白的纯化方法,其特征在于,具体包括以下步骤:
S1:采用纯水将SA重组蛋白粗品进行稀释,获得SA稀释样品;
S2:使用透析袋装入步骤S1的SA稀释样品,放入纯水中进行透析,获得透析后的样品;
S3:在步骤S2中透析后的样品中加入碳酸钠和氯化钠,搅拌溶解;
S4:使用层析填料进行亲和纯化,获得洗脱产物;
S5:将步骤S4获得的洗脱产物进行透析,并保存。
2.根据权利要求1所述的SA重组蛋白的纯化方法,其特征在于,所述步骤S1中的SA重组蛋白粗品来源于大肠杆菌裂解上清,将SA重组蛋白粗品稀释至5mg/mL~10mg/mL。
3.根据权利要求1所述的SA重组蛋白的纯化方法,其特征在于,在所述步骤S2中使用截留量为3.0kDa~4.2kDa的透析袋进行透析,其中透析袋中放入50℃~55℃纯水,至少透析4次,每半小时换液1次,且透析过程中保持恒温。
4.根据权利要求3所述的SA重组蛋白的纯化方法,其特征在于,所述步骤S3具体步骤为:在所述步骤S3中在透析后的样品中加入碳酸钠至样品终浓度为45mM~60mM;再加入氯化钠至样品终浓度400mM~600mM,搅拌溶解。
5.根据权利要求3所述的SA重组蛋白的纯化方法,其特征在于,在所述步骤S4中使用2-亚氨基生物素层析填料进行亲和纯化,其中采用的平衡液的配方为45mM~60mM碳酸钠、400mM~600mM氯化钠,pH值为10.5~11.5;洗脱液的配方为45mM~60mM乙酸钠、400mM~600mM氯化钠,pH值为3.5~4.5。
6.根据权利要求3所述的SA重组蛋白的纯化方法,其特征在于,在所述步骤S5中将洗脱产物用8mM~15mM PBS缓冲液进行透析,-20℃保存。
7.根据权利要求6所述的SA重组蛋白的纯化方法,其特征在于,所述步骤S5透析后的产物的蛋白得率为10.2mg/L。
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