[发明专利]SA重组蛋白的纯化方法

说明书

本发明公开了一种该SA重组蛋白的纯化方法，具体包括以下步骤：S1：采用纯水将SA重组蛋白粗品进行稀释，获得SA稀释样品；S2：使用透析袋装入步骤S1的SA稀释样品，放入纯水中进行透析，获得透析后的样品；S3：在步骤S2中透析后的样品中加入碳酸钠和氯化钠，搅拌溶解；S4：使用层析填料进行亲和纯化，获得洗脱产物；S5：将步骤S4获得的洗脱产物进行透析，并保存。

技术领域

本发明属于蛋白纯化的技术领域，尤其涉及一种SA重组蛋白的纯化方法。

背景技术

现有链霉亲和素(SA)重组蛋白基本都由大肠杆菌重组表达，再经亲和纯化获得目的蛋白。但是重组表达的SA会与大肠杆菌中的生物素结合，造成重组SA的结合位点被占用而失去结合活性。一般的处理方式是放弃此部分SA，如可以将此部分SA的生物素去除，则可以大大增加生产得率，增加成本优势。

中国专利文献(CN 103695508 A)公开了一种制备金黄色葡萄球菌HI重组蛋白的发酵工艺和纯化工艺，HI重组蛋白工程菌发酵工艺之后纯化HI重组蛋白工艺，包括依次进行的GST～琼脂糖凝胶4B亲和层析、阳离子交换层析、置换缓冲液及去内毒素。所述阳离子交换层析使用MMC层析柱，使用的缓冲液为，缓冲液A:25mM NaAC～HAC，pH4.5，缓冲液B:50mM PB+1M NH4Cl，pH7.0；上样流速为4.7mL/min，洗脱流速：4.7mL/min；洗脱程序：0～100％B，20个柱体积(CV)；优选地，上样pH值为7.0～7.5，洗脱pH值为11.0；所述置换缓冲液使用G25层析柱，使用缓冲液为疫苗稀释液；所述去内毒素使用Q HP层析柱，使用缓冲液为缓冲液A：疫苗稀释液，缓冲液B:1M NaOH。

因此，为了最大程度上回收到SA重组蛋白，降低成本，有必要开发一种SA重组蛋白的纯化方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种SA重组蛋白的纯化方法，能够最大程度上回收到SA重组蛋白，降低成本。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是，该SA重组蛋白的纯化方法，具体包括以下步骤：

S1：采用纯水将SA重组蛋白粗品进行稀释，获得SA稀释样品；

S2：使用透析袋装入步骤S1的SA稀释样品，放入纯水中进行透析，获得透析后的样品；

S3：在步骤S2中透析后的样品中加入碳酸钠和氯化钠，搅拌溶解；

S4：使用层析填料进行亲和纯化，获得洗脱产物；

S5：将步骤S4获得的洗脱产物进行透析，并保存。

优选地，所述步骤S1中的SA重组蛋白粗品来源于大肠杆菌裂解上清，将SA重组蛋白粗品稀释至5mg/mL～10mg/mL。

优选地，在所述步骤S2中使用截留量为3.0kDa～4.2kDa的透析袋进行透析，其中透析袋中放入50℃～55℃纯水，至少透析4次，每半小时换液1次，且透析过程中保持恒温。

采用上述技术方案，对SA重组蛋白粗品用截留量为3.0kDa～4.2kDa的透析袋中使用50℃～55℃的纯水进行透析约2h，能将SA重组蛋白与生物素分开；其中透析温度50℃～55℃和透析时间2h既保证SA重组蛋白与生物素可以分离，又不会使SA重组蛋白变性沉淀，截留量为3.0kDa～4.2kDa的透析袋能保证游离生物素小分子可以扩散出透析袋的同时使蛋白留在透析袋内。SA重组蛋白粗品经50℃～55℃的热水处理后，能有效提高蛋白回收量；可以最大程度上回收到SA重组蛋白，降低成本。

优选地，所述步骤S3具体步骤为：在所述步骤S3中在透析后的样品中加入碳酸钠至样品终浓度为45mM～60mM；再加入氯化钠至样品终浓度400mM～600mM，搅拌溶解。