[发明专利]一种fusA基因的用途及其指示灿烂弧菌进入持留状态的方法在审

专利信息
申请号: 202310000892.4 申请日: 2023-01-03
公开(公告)号: CN115927689A 公开(公告)日: 2023-04-07
发明(设计)人: 张卫卫;李亚;阮逸珑 申请(专利权)人: 宁波大学
主分类号: C12Q1/689 分类号: C12Q1/689;C12Q1/6851;C12N15/31;C12R1/63
代理公司: 宁波奥圣专利代理有限公司 33226 代理人: 何仲
地址: 315211 浙*** 国省代码: 浙江;33
权利要求书: 查看更多 说明书: 查看更多
摘要:
搜索关键词: 一种 fusa 基因 用途 及其 指示 灿烂 弧菌 进入 状态 方法
【权利要求书】:

1.一种fusA基因在细菌代谢状态指示剂方面的用途,其特征在于:所述的fusA基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.一种fusA基因指示灿烂弧菌进入持留状态的方法,其特征在于包括以下步骤:设计fusA基因的上下游扩增引物,结合实时荧光定量PCR方法,若灿烂弧菌fusA基因表达量降低至活跃菌的40%及以下,即可认定灿烂弧菌进入低代谢的持留状态,其中fusA基因PCR扩增的上游引物fusAF序列为:5'-CATTCAAGAACAAGGGTG-3';fusA基因PCR扩增的下游引物fusAR序列为:5'-CGAACGAAAGTTAGAGCA-3'。

3.根据权利要求2所述的一种fusA基因指示灿烂弧菌进入持留状态的方法,其特征在于具体步骤如下:

(1)收集OD600=0.6-2.0的灿烂细菌菌液,均分成两份,一份作为活跃菌;另一份加入250μg/mL的抗生素作用4小时,12,000 g 离心5分钟收集菌体,此部分菌体即为通过降低代谢水平耐受抗生素的持留菌,使用细菌RNA提取试剂盒,提取持留菌和活跃菌中的总RNA,使用反转录试剂盒将总RNA中的mRNA反转录为cDNA;

(2)利用实时荧光定量PCR试剂盒中的试剂配制以下的反应混合液:SYBR 反应液,10 μL;10 μM fusAF引物,1 μL;10 μM fusAR引物,1 μL;cDNA模板,0.5 μL;内参染料ROX,0.5 μL;ddH2O,7 μL;内参基因为16S rDNA,按照fusA基因扩增的方法制备内参基因的扩增反应混合液;

(3)将配制的反应混合物置于实时荧光定量PCR仪进行扩增反应:反应程序为:(1)95℃,5分钟;(2)95 ℃,30秒;(3)52 ℃,20秒;(4)72 ℃,20秒回到第(2)步进行40个循环;(5)72 ℃,10分钟,获得样本的fusA基因和内参基因的CT值;

(4)计算基因的表达备注:采用2-△△Ct的方法计算基因的相对表达水平:2-△△CT=2-[(SfusA的CT-CfusA的CT)-(S16S的CT-C16S的CT)],其中S为样本菌体,C为活跃菌菌体,将活跃菌中fusA基因的表达量看作1,样本菌体中的fusA基因相对表达量低于活跃菌的40%即为阳性值,说明细菌的代谢状态进入了低代谢的持留状态。

4.根据权利要求3所述的一种fusA基因指示灿烂弧菌进入持留状态的方法,其特征在于:步骤(1)中收集培养至稳定期OD600=2.0的灿烂细菌菌液。

下载完整专利技术内容需要扣除积分,VIP会员可以免费下载。

该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于宁波大学,未经宁波大学许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服

本文链接:http://www.vipzhuanli.com/pat/books/202310000892.4/1.html,转载请声明来源钻瓜专利网。

×

专利文献下载

说明:

1、专利原文基于中国国家知识产权局专利说明书;

2、支持发明专利 、实用新型专利、外观设计专利(升级中);

3、专利数据每周两次同步更新,支持Adobe PDF格式;

4、内容包括专利技术的结构示意图流程工艺图技术构造图

5、已全新升级为极速版,下载速度显著提升!欢迎使用!

请您登陆后,进行下载,点击【登陆】 【注册】

关于我们 寻求报道 投稿须知 广告合作 版权声明 网站地图 友情链接 企业标识 联系我们

钻瓜专利网在线咨询

周一至周五 9:00-18:00

咨询在线客服咨询在线客服
tel code back_top