[发明专利]一种fusA基因的用途及其指示灿烂弧菌进入持留状态的方法在审
申请号: | 202310000892.4 | 申请日: | 2023-01-03 |
公开(公告)号: | CN115927689A | 公开(公告)日: | 2023-04-07 |
发明(设计)人: | 张卫卫;李亚;阮逸珑 | 申请(专利权)人: | 宁波大学 |
主分类号: | C12Q1/689 | 分类号: | C12Q1/689;C12Q1/6851;C12N15/31;C12R1/63 |
代理公司: | 宁波奥圣专利代理有限公司 33226 | 代理人: | 何仲 |
地址: | 315211 浙*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 fusa 基因 用途 及其 指示 灿烂 弧菌 进入 状态 方法 | ||
1.一种
2.一种
3.根据权利要求2所述的一种
(1)收集OD600=0.6-2.0的灿烂细菌菌液,均分成两份,一份作为活跃菌;另一份加入250μg/mL的抗生素作用4小时,12,000 g 离心5分钟收集菌体,此部分菌体即为通过降低代谢水平耐受抗生素的持留菌,使用细菌RNA提取试剂盒,提取持留菌和活跃菌中的总RNA,使用反转录试剂盒将总RNA中的mRNA反转录为cDNA;
(2)利用实时荧光定量PCR试剂盒中的试剂配制以下的反应混合液:SYBR 反应液,10 μL;10 μM fusAF引物,1 μL;10 μM fusAR引物,1 μL;cDNA模板,0.5 μL;内参染料ROX,0.5 μL;ddH2O,7 μL;内参基因为16S rDNA,按照
(3)将配制的反应混合物置于实时荧光定量PCR仪进行扩增反应:反应程序为:(1)95℃,5分钟;(2)95 ℃,30秒;(3)52 ℃,20秒;(4)72 ℃,20秒回到第(2)步进行40个循环;(5)72 ℃,10分钟,获得样本的
(4)计算基因的表达备注:采用2-△△Ct的方法计算基因的相对表达水平:2-△△CT=2-[(SfusA的CT-CfusA的CT)-(S16S的CT-C16S的CT)],其中S为样本菌体,C为活跃菌菌体,将活跃菌中
4.根据权利要求3所述的一种
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