[发明专利]一种明胶与γ蛋白膜乳化形成的明胶载体结构均聚物的制备与应用

说明书

本申请涉及一种一种明胶与γ蛋白膜乳化形成的明胶载体结构均聚物的制备与应用，其包括以下步骤：S1制备改性剂，S2明胶改性，S3交联。本申请中通过对明胶进行改性，封闭其碱性氨基基团，降低其等电点，因而其在强酸性条件下，不会发生崩解和溶胀，而在偏中性条件下会发生溶胀，形成具有pH响应的载体，其与γ蛋白复合后，可以保护其不被酸液腐坏，使其活性降低。本申请中改性明胶与γ蛋白复合时，采用滴加聚乙二醇和硬脂酸水溶液的方式使其发生乳化交联，可以控制γ蛋白沉降和乳化胶料的速度，从而可以刚好实现对γ蛋白交联包覆，提高封装率。

技术领域

本申请涉及生物制品的技术领域，尤其是涉及一种明胶与γ蛋白膜乳化形成的明胶载体结构均聚物的制备与应用。

背景技术

卵黄抗体(Immunoglobulin Y,IgY)是指鸟类、两栖动物以及爬行动物的主要血清抗体，目前，鸡IgY是应用最广泛的IgY，其主要通过免疫注射产蛋鸡，即可由其生产的蛋黄中提取相应的抗体，并可用于相应疾病的预防和治疗，这类制剂称为卵黄抗体。卵黄抗体在禽胚孵化过程中逐渐进入禽胚血液，为刚出壳雏鸡提供被动免疫保护，在雏鸡疾病预防中具有重要作用。卵黄中的主要成分是蛋白质和脂肪，其比例为1:2。大部分蛋白质都是脂蛋白，存在于卵黄颗粒中，不溶于水，只有卵黄球蛋白(α、β、γ)是水溶性的，而IgY是γ卵黄球蛋白(γ蛋白)。

IgY具有化学性质稳定、特异性强、制备简单、产量高、成本低、绿色安全、免疫检测中干扰小的优点，并在食品、医药、生物品、生物检测等方面得到了广泛应用。例如在食品领域IgY已经被运用到婴幼儿食品、中老年保健品中，用于提高人体对某种疾病的抵抗力；在医药领域，IgY已经用于防治人类和动物的胃肠道感染疾病。

卵黄抗体IgY虽然有诸多优势，但是其在应用过程中也会受到很多的限制。IgY胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶有一定的抵抗力，但是其对酸性环境，尤其是含有胃蛋白酶的酸性环境十分敏感，在酸性环境(pH≤4)时容易逐渐失活，在pH≤4.5且含有胃蛋白酶的情况下，会迅速失活；而蛋白的消化吸收主要是在肠道，过早的胃部失活，会严重影响IgY。

为了提高IgY的活性，一般会对采用载体对其包埋或者负载，从而提高其稳定性；目前关于IgY的载体主要包括有脂质体、聚合物等；但是脂质体载体的包埋往往包埋率较低，而且其对抗胃蛋白酶的效果较差；而聚合物的载体虽然有着较好的包埋率和对IgY活性的保护效果，但是其存在潜在可降解性和能否被吸收的危害性，因而较难应用于食品和药品领域。

发明内容

为了提升IgY活性和利用率，本申请中提供了一种明胶与γ蛋白膜乳化形成的明胶载体结构均聚物的制备与应用。

第一个方面，本申请中提供了一种明胶与γ蛋白膜乳化形成的明胶载体结构均聚物的制备，采用如下技术方案：

一种明胶与γ蛋白膜乳化形成的明胶载体结构均聚物的制备，包括以下步骤：

S1、制备改性剂：将水杨酸加入到溶剂1中，然后滴加乙酸酐进行回流反应，待反应完毕后，蒸馏出去溶剂1，得到中间体1；将中间体1与溶剂2进行混合后，加入氯化亚砜进行反应，反应完毕后，蒸馏去除溶剂2，纯化和干燥后，得到改性剂；

具体合成路线图如下：

S2：明胶改性：将明胶加入到水中进行溶胀，然后加入NaOH调节pH至8～9，加入步骤S1中的改性剂，接着进行搅拌反应，反应完毕后，加入盐酸进行沉降和洗涤，接着采用蒸馏水进行溶胀，并加入NaOH调节pH至6～7，洗涤和冻干后，得到改性明胶粉；

具体合成路线如下：

S3、交联：将步骤S2中的改性明胶粉和IgY加入到PBS缓冲液中，配置成混合溶液；在搅拌条件下，向混合溶液中滴加聚乙二醇和硬脂酸水溶液，使其发生乳化交联作用，反应完毕后，接着加入盐酸，使其沉降，离心洗涤后，进行冻干，得到明胶与γ蛋白膜乳化形成的明胶载体结构均聚物。