[发明专利]检测槲叶褐斑病病原菌的引物组、试剂盒及方法和应用在审
| 申请号： | 202310021963.9 | 申请日： | 2023-01-07 |
| 公开（公告）号： | CN115820925A | 公开（公告）日： | 2023-03-21 |
| 发明（设计）人： | 刘微;汪琪;王勇;赵雪妃;江云敏;姜义仁;石生林;秦利 | 申请（专利权）人： | 沈阳农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12N15/11;C12N15/113;C12R1/645 |
| 代理公司： | 沈阳一诺君科知识产权代理事务所(普通合伙) 21266 | 代理人： | 刘丽娟 |
| 地址： | 110000 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 检测 褐斑 病原菌 引物 试剂盒 方法 应用 | ||
1.一种检测槲叶褐斑病病原菌的引物组，其特征在于，包括：
上游引物：5’-CCTACCTCTGTTGCTTTGGC-3’；
下游引物：5’-CTCCGAAGCGAGATGTATGT-3’。
2.一种如权利要求1所述的检测槲叶褐斑病病原菌的引物组在检测槲叶褐斑病病原菌中的应用。
3.一种槲叶褐斑病病原菌的核糖体ITS基因，其特征在于，以感染槲叶褐斑病病害的槲树叶片的总DNA为模板，利用如权利要求1所述的检测槲叶褐斑病病原菌的引物组进行PCR扩增获得，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
4.一种包含权利要求1所述的检测槲叶褐斑病病原菌的引物组的检测槲叶褐斑病病原菌的试剂盒。
5.根据权利要求4所述的检测槲叶褐斑病病原菌的试剂盒，其特征在于：该试剂盒还包括2×Taq Master Mix，Template DNA，ddH2O。
6.一种检测槲叶褐斑病和/或槲叶褐斑病病原菌的方法，其特征在于：以待测样本的总DNA为模板，利用权利要求1或4所述引物组后试剂盒进行PCR扩增；将PCR扩增反应的产物进行凝胶电泳，出现大小为400-500bp的扩增条带，则判定待测样本为槲叶褐斑病阳性样本或含有槲叶褐斑病病原菌；或将回收大小对应的PCR产物片段进行Sanger测序，然后将测序结果与槲叶褐斑病病原菌的核糖体ITS基因序列进行比对判定待测样本是否含有槲叶褐斑病阳性样本或含有槲叶褐斑病病原菌。
7.根据权利要求6所述的检测槲叶褐斑病和/或槲叶褐斑病病原菌的方法，其特征在于：
所述PCR扩增的反应体系为：2×Taq Master Mix 10μL，10μM以上上游引物1.0μL，10μM以上下游引物1.0μL，Template DNA 1μL，余量用ddH2O补
足，共25μL；所述PCR扩增的反应条件为：94℃，3min；94℃，30s；55℃，
30s；72℃，1min；35个循环；72℃，5min。
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