[发明专利]一种用于快速鉴定两种玉米灰斑病菌的LAMP检测方法在审
| 申请号： | 202310022615.3 | 申请日： | 2023-01-08 |
| 公开（公告）号： | CN116377034A | 公开（公告）日： | 2023-07-04 |
| 发明（设计）人： | 谭小珊;胡莹;彭钊;王哲男;刘靖愉 | 申请（专利权）人： | 吉林农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6844 | 分类号： | C12Q1/6844;C12Q1/6895;C12N15/11;C12R1/645 |
| 代理公司： | 吉林长春新纪元专利代理有限责任公司 22100 | 代理人： | 陈宏伟 |
| 地址： | 130116 吉林省*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 快速 鉴定 玉米 病菌 lamp 检测 方法 | ||
1.一种快速鉴定两种灰斑病致病菌的检测方法LAMP，包括以下步骤：
1）在根据玉米常见病原菌的基因组序列，过KEC软件进行序列对比分析，最后得到GLS特异性序列；
2）将获得的特异性序列在PrimerExplorerV5上设计LAMP引物，通过引物设计原则选择适合的引物，所述LAMP引物包括正向外引物F3，反向外引物B3，正向内引物FIP和反向内引物BIP，核苷酸序列如下：
F3：5'-CCCTTTCACTTTCGCCTACT-3'；
B3：5'-GAAGCGAACGACTCCGATC-3'；
FIP：5'-GCAGGGAATTCAATGCGTCGCGCATTCAAATCAAACCCCCG-3'；
BIP：5'-ATCACAAGGGCGCGGCAAATACCACGTTCGAAGGAAAAGC-3'；
F3：5'-ACCGCTTCCTCCCAATGA-3'；
B3：5'-CGGGAAATTCGGTCTCGG-3'；
FIP：5'-CCACTGAGTGCAGCACGGTAAAACATCAGCACATCTCACGG-3'；
BIP：5'-GGTGATGAGGTCGTATGCGTCCAACAGCTCTTCGACCCCA-3'；
3）检测引物特异性，通过PCR检测LAMP引物的特异性；
4）建立LAMP检测体系，反应条件为65℃，1h；酶失活80℃，5min；
5）LAMP检测，阳性对照为DNA，阴性对照为另一个致病菌，加入SYBR GreenⅠ使结果可视化，阳性在紫外下散发绿色荧光，阴性呈橙色，紫外下不产生荧光；
6）配制PEG溶液：称取60g PEG200、0.93ml KOH，加入39ml ddH2O，将PH调至13.4；
7）室内接种两种病原菌后，利用PEG溶液（聚乙二醇）快速提取灰斑病菌的DNA，取1uL产物加入LAMP体系中进行扩增，从而快速区分两种致病菌。
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