[发明专利]一种用于快速鉴定两种玉米灰斑病菌的LAMP检测方法

说明书

本发明提供一种用于快速鉴定两种玉米灰斑病菌的LAMP检测方法，快速鉴定方法具有特异性强、准确性高、操作简单快速、实用性强的特点；完全适合目前的检测需求，适合农户或农民自己进行检测，再根据检测结果进行药剂防治或采取其它防治措施，该方法建立后同样适用于其它菌类的鉴定及预测预报，具有良好的应用前景，检测成本低，相比常规检测及鉴定方法，该方法成本低。

技术领域

本发明公开了一种用于快速鉴定两种玉米灰斑病菌的LAMP检测方法（环介导等温扩增技术），专用于玉米灰斑病（GLS）两种致病菌 Cercospora Zeina（玉米尾孢菌）和 Cercospora zeae-maydis（玉蜀黍尾孢菌）的快速鉴定，同时可实现田间玉米灰斑病的早期诊断和致病菌类型的鉴定，属于农作物病害检测、鉴定及防治及生物技术领域。

背景技术

玉米由于其应用广、产量高，在世界范围内被广泛种植， 随着栽培技术的不断优化和优良玉米杂交种的推广，玉米产业得到了较快发展，总产量稳步提升。近年来，玉米灰斑病病害一直呈加重的趋势，每年都造成严重的经济损失，所以对于病害的快速检测及预测预报逐渐成为研究热点，病害的快速检测及早期诊断为保障粮食安全及环境安全提供理论基础。

目前报道共有 4 种尾孢属真菌能引起玉米灰斑病：包括玉蜀黍尾孢菌( C.zeae-maydis)，玉米尾孢菌( C.zeina)，高梁尾孢玉蜀黍变种( Cercospora sorghi var. maydis)和未确定学名( Cercospora. sp)；玉米灰斑病是尾孢属真菌引起的玉米叶部病害，主要危害玉米叶片。病变从植株下部叶片最先发生，随后侵染上部叶片，病斑先呈现为小斑点，受叶脉限制，最后形成灰褐色矩形条形斑。玉米在感染灰斑病菌后14至28天为潜伏期，发病情况和环境条件密切相关，在高温高湿的条件下产生大量分生孢子，除了环境条件，另一个主要发病因素取决于初侵染源的数量。病斑在叶面上沿着叶脉扩展，造成叶片局部或整片干枯，破坏植株正常光合作用；高温高湿时扩散到整个植株，该病害影响玉米灌浆导致玉米产量降低，严重时甚至绝收。玉米病害常常是多种病害同时期发生侵染，例如玉米大斑病、小斑病、弯孢叶斑病与灰斑病大多同时发生，有时前后发病，常常呈现混合侵染。

发明内容

本发明提供了一种用于快速鉴定两种玉米灰斑病菌的LAMP检测方法（环介导等温扩增技术），由于传统鉴定两种致病菌的方法耗时长、对理论知识要求高以及需要PCR仪等设备问题，本发明提供了一种简单、快速、便捷且检测价格低的方法。

本发明公开的一种用于快速鉴定两种玉米灰斑病菌的LAMP检测方法，技术方案如下：

利用KEC软件对GLS的基因组和玉米其它常见病害病原菌的基因组进行比较分析，找到GLS特异性序列，在PrimerExplorerV5上设计LAMP引物，用设计的引物和玉米上其他病原菌的DNA进行扩增，检测该引物是否特异。

本发明所述的一种用于快速鉴定两种玉米灰斑病菌的LAMP检测方法，包括以下步骤：

1）在NCBI上下载的玉米常见病原菌的基因组序列，过KEC软件进行序列对比分析，最后得到GLS特异性序列；

2）将获得的特异性序列在PrimerExplorerV5上设计LAMP引物，通过引物设计原则选择适合的引物，所述LAMP引物包括正向外引物F3，反向外引物B3，正向内引物FIP和反向内引物BIP，核苷酸序列如下：

C.zeae-maydis

F3：5'-CCCTTTCACTTTCGCCTACT-3'；