[发明专利]一种检测分子伴侣介导的自噬活性的报告系统及其应用

权利要求书

1.一种检测分子伴侣介导的自噬活性的报告系统，其特征在于，所述报告系统以表达载体pLVX-IRES-puro为基本骨架，在所述pLVX-IRES-puro的启动子后插入目的基因CMA报告序列，所述CMA报告序列包含荧光蛋白、连接在荧光蛋白N末端的含有五肽基序KFERQ的S-Tag1、连接在荧光蛋白C末端的含有五肽基序KDRVQ的S-Tag2；

其中，所述表达载体pLVX-IRES-puro的序列如SEQ ID NO.1所示。

2.如权利要求1所述的检测分子伴侣介导的自噬活性的报告系统，其特征在于，所述荧光蛋白包含EGFP、mCherry、Dendra2中的任意一种。

3.如权利要求2所述的检测分子伴侣介导的自噬活性的报告系统，其特征在于，所述荧光蛋白是Dendra2，所述Dendra2的序列如SEQ ID NO.2所示。

4.如权利要求1所述的检测分子伴侣介导的自噬活性的报告系统，其特征在于，所述报告系统还包含若干个刚性linker，其中，所述含有五肽基序KFERQ的S-Tag1和所述荧光蛋白之间至少连接一刚性linker，所述含有五肽基序KDRVQ的S-Tag2和所述荧光蛋白之间至少连接一刚性linker。

5.如权利要求1所述的检测分子伴侣介导的自噬活性的报告系统，其特征在于，所述表达载体pLVX-IRES-puro至少包含复制起始位点Ori、启动子promoter、内部核糖体进入位点序列IRES和/或RRE、非融合抗性标记基因puro、氨苄抗生素抗性基因AmpR、逆转录病毒顺式调节元件HIV-1ψ、3’LTR增强子序列。

6.如权利要求5所述的检测分子伴侣介导的自噬活性的报告系统，其特征在于，所述启动子promoter是CMV启动子。

7.一种包含权利要求1～6中任意一项所述的检测分子伴侣介导的自噬活性的报告系统的重组细胞系。

8.如权利要求7所述的重组细胞系，其特征在于，所述重组细胞系的宿主细胞至少包含小鼠和人的原代细胞、小鼠和人的肿瘤细胞、体外培养的连续细胞系中的任意一种。

9.一种如权利要求1～6中任意一项所述的检测分子伴侣介导的自噬活性的报告系统的应用，其特征在于，所述检测分子伴侣介导的自噬活性的报告系统用于神经退行性疾病、视网膜退行性病变、癌症、发育、衰老等病理生理过程中实时监测CMA活性的变化。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述检测分子伴侣介导的自噬活性的报告系统用于评估药物或基因改造对CMA活性的干预效果。