[发明专利]一种肝细胞癌类器官的培养基和培养方法

权利要求书

1.一种肝细胞癌类器官的培养基，其特征在于，所述培养基包括RPMI1640基础培养基和特异性添加因子；其中：

所述特异性添加因子的组成为：青链霉素100μg/mL；人胰岛素0.5-5μM；人表皮生长因子50ng/mL；人转铁蛋白20-100nM；Primocin 100μg/mL；亚硒酸钠10-50nM；丙酮酸钠0.2-5mM；胎牛血清1％-10％，v/v；A83-01 5μM；Y-27632 10μM；

所述特异性添加因子各组分的浓度均以其在所述RPMI1640基础培养基中的浓度为准。

2.根据权利要求1所述的肝细胞癌类器官的培养基，其特征在于，所述培养基中人胰岛素为2.5μM，人转铁蛋白为60nM，亚硒酸钠为40nM。

3.一种肝细胞癌类器官的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)获得的肝细胞癌组织进行预处理，用清洗液将预处理后的肝细胞癌组织充分清洗；所述清洗液中含有PBS磷酸盐缓冲液和青链霉素；

(2)将上述肝细胞癌组织清洗，沉淀，弃去约上清液；重复洗一次，弃上清；

(3)加入10mL胶原酶消化液，于37℃培养箱中消化30-180分钟；所述胶原酶消化液中含有PBS磷酸盐缓冲液、青链霉素和胶原酶；

(4)当悬液中具有50％-100％的单细胞时停止消化，用100微米孔径滤膜进行过滤，梯度转速离心，洗涤细胞；

(5)用权利要求1或2所述肝细胞癌类器官的培养基重悬细胞，计数，将细胞重悬于肝细胞癌类器官的培养基-基质胶混合液中，所述肝细胞癌类器官的培养基-基质胶混合液中所述肝细胞癌类器官的培养基与基质胶体积比为1:1-4；

(6)每3-5天更换权利要求1或2所述肝细胞癌类器官的培养基，1-3周传代一次；

(7)用权利要求1或2所述肝细胞癌类器官的培养基重悬细胞，计数，将细胞重悬于所述肝细胞癌类器官的培养基-基质胶混合液中进行培养得到。

4.根据权利要求3所述肝细胞癌类器官的培养方法，其特征在于，步骤(1)中，所述肝细胞癌组织包括肝细胞肝癌、混合型肝癌和肝母细胞癌。

5.根据权利要求3所述肝细胞癌类器官的培养方法，其特征在于，步骤(1)中，所述青链霉素的浓度为50-400μg/mL。

6.根据权利要求3所述肝细胞癌类器官的培养方法，其特征在于，步骤(3)中，以所述胶原酶消化液为基准，所述青链霉素的浓度为50-400μg/mL，所述胶原酶为IV型胶原酶，含量为1-10mg/mL。

7.根据权利要求3所述肝细胞癌类器官的培养方法，其特征在于，步骤(5)中，将2000-10000个细胞重悬于50μL所述肝细胞癌类器官的培养基-基质胶混合液中。

8.根据权利要求3所述肝细胞癌类器官的培养方法，其特征在于，步骤(6)中，所述传代的比例为1:2-5。

9.根据权利要求3所述肝细胞癌类器官的培养方法，其特征在于，步骤(7)中，将2000-10000个细胞重悬于50μL所述肝细胞癌类器官的培养基-基质胶混合液中进行培养。