[发明专利]基于电化学技术的小分子-DNA结合常数计算方法

权利要求书

1.基于电化学技术的小分子-DNA结合常数计算方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)制备DNA修饰电极：

将末端功能化的DNA制成溶液，涂于电极界面，交联孵育后清洗、吹干，得到DNA修饰电极；

(2)测定电化学信号：

测定所述DNA修饰电极的电化学信号S1；

取污染物小分子制成不同浓度溶液，将所述DNA修饰电极浸泡于污染物小分子溶液中进行孵育；孵育后DNA修饰电极清洗、吹干，测定电化学信号S2；

计算各浓度污染物小分子溶液孵育前后DNA修饰电极的电化学信号变化值Sw＝|S2-S1|；

(3)确定污染物小分子检测浓度：

根据电化学信号变化值最大值S_C，确定电化学信号变化值为S_CK的污染物小分子溶液浓度C_k为测定污染物小分子与DNA结合常数的检测浓度；S_CK/S_C＞0.70；

(4)构建标准曲线：

选择结合常数已知的不同污染物小分子，分别配置成浓度为C_k的溶液，按步骤(2)方法测定电化学信号，计算电化学信号变化值；根据结合常数与电化学信号变化值绘制标准曲线；

(5)测定结合常数：

配置浓度为C_k的待测污染物小分子；按步骤(2)方法测定电化学信号，计算电化学信号变化值，结合标准曲线计算结合常数。

2.根据权利要求1所述的基于电化学技术的小分子-DNA结合常数计算方法，其特征在于，

步骤(1)中，

末端功能化的位点在DNA的5’端或3’端；

功能化官能团包括氨基、羧基、醛基、巯基。

3.根据权利要求1所述的基于电化学技术的小分子-DNA结合常数计算方法，其特征在于，

步骤(1)中，

所述DNA为hairpin DNA，其中双链stem部分的碱基对数不少于5。

4.根据权利要求1所述的基于电化学技术的小分子-DNA结合常数计算方法，其特征在于，

步骤(1)中，

所述电极为经活化处理的金电极、玻碳电极、碳电极或丝网印刷电极；

所述活化处理包括酸溶液活化、碱溶液活化、盐溶液活化和/或电化学活化。

5.根据权利要求1所述的基于电化学技术的小分子-DNA结合常数计算方法，其特征在于，

步骤(1)中，

交联孵育使用的交联剂为三(2-羧乙基)膦盐酸盐、二环己基碳二亚胺、碳酰二亚胺或N-羟基硫代琥珀酰亚胺；

孵育时间为10-120min。

6.根据权利要求1所述的基于电化学技术的小分子-DNA结合常数计算方法，其特征在于，

步骤(2)中，

采用三电极测定体系测定电化学信号；

以污染物小分子溶液孵育前后DNA修饰电极作为工作电极，铂丝电极作为对电极，银/氯化银电极作为参比电极；

测定方法包括电流法、电位法或电阻法。

7.根据权利要求6所述的基于电化学技术的小分子-DNA结合常数计算方法，其特征在于，

步骤(2)中，

电解质溶液为PB、Tris、醋酸盐或碳酸盐缓冲溶液，浓度为1-200mM，pH6.0-8.0；

测定电信号所用指示物质为K₃[Fe(CN)₆]和K₄[Fe(CN)₆]。