[发明专利]与黑山羊繁殖相关的差异基因及检测方法和应用

说明书

本发明提供了与黑山羊繁殖相关的差异基因及检测方法和应用，涉及生物育种技术领域。本发明通过转录组测序筛选到与云上黑山羊繁殖相关的差异基因GAB2，以及miR‑novel‑535。本发明证实了miR‑535在高产云上黑山羊中显著高表达；GAB2基因在高产云上黑山羊中显著低表达。本发明miR‑535靶向GAB2基因3′‑UTR并抑制其表达水平。本发明确定miR‑novel‑535与GAB2的调控关系，为云上黑山羊繁殖性状相关候选基因GAB2及其关键调控元件miR‑novel‑535的发现及调控关系进行阐述与解释。

技术领域

本发明属于生物育种技术领域，具体涉及与黑山羊繁殖相关的差异基因及检测方法和应用。

背景技术

山羊产羔数和排卵量的因素很多，对山羊繁殖力有重大影响的基因尚不清楚。高产和低产品种的特点体现在发情周期不同。因此，确定卵泡发育的分子机制一直是山羊遗传育种研究的重点。近年来，对山羊繁殖力机制的研究主要集中在候选基因及其调控因子，如miRNAs、转录因子和各种调控途径等方面。此外，影响山羊繁殖能力的因素很多，包括卵泡的招募、发育、选择和排卵。一些信号通路，如Wnt/β-catenin和骨形态发生蛋白(BMP)/Smad通路，参与了卵泡的发育。云上黑山羊是我国云南省的优良产肉山羊品种，具有肉质细嫩、风味独特等诸多优点。云上黑山羊具有多产的特点，其调控繁殖性状相关的分子机制尚不充足。

生长因子受体结合蛋白2(GAB2)是一种连接蛋白，属于Gab家族。该蛋白含有信号分子结合部位，如SH2结构域蛋白酪氨酸磷酸酶-2(SHP2)和磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)，它们作用于几种细胞因子、抗原、激素和生长因子的膜受体的下游，调节多种信号通路。有研究报道GAB2和PI3K之间的相互作用调节PI3K-AKT信号通路，参与细胞增殖、分化、凋亡和葡萄糖转运等多种调节途径。而在云上黑山羊卵巢中GAB2基因的调控元件及调控关系尚不明确。

发明内容

本发明的目的在于提供与黑山羊繁殖相关的差异基因及检测方法和应用，证实miR-novel-535和GAB2存在功能关系，可通过相互调控影响黑山羊繁殖性状。

本发明提供了与黑山羊繁殖相关的差异基因，所述差异基因包括miR-novel-535和GAB2；

所述miR-novel-535的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明还提供了一组检测上述差异基因表达量的引物对，包括针对miR-novel-535设计的引物对miR-novel-535-F和miR-novel-535-R，所述miR-novel-535-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，miR-novel-535-R的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

针对GAB2设计的引物对GAB2-F和GAB2-R，所述GAB2-F的核苷酸序列如SEQ IDNO.4所示，GAB2-R的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。

本发明还提供了一种评价黑山羊繁殖性状的方法，包括以下步骤：利用上述引物对检测上述差异基因的表达量，高产黑山羊的基因组中miR-novel-535的表达量显著高于低产黑山羊；高产黑山羊的基因组中GAB2的表达量显著低于低产黑山羊。

优选的，利用qPCR的方法检测所述差异基因的表达量，所述qPCR的程序包括：95℃预变性5s；95℃变性5s，60℃退火30s，40个循环。

优选的，以山羊RPL19为校正基因，根据所述校正基因设计的引物对包括RPL19-F和RPL19-R，所述RPL19-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示，RPL19-R的核苷酸序列如SEQID NO.7所示。

本发明还提供了一种调控GAB2基因表达的试剂在制备影响黑山羊繁殖性状的产品中的应用。