[发明专利]一种快速无损检测细胞中麦角硫因的方法

说明书

本发明公开了一种快速无损检测细胞中麦角硫因的方法。基于拉曼光谱快速检测单个活细胞内麦角硫因。具体操作为：获取待测活体细胞液，洗涤，调整菌悬液浓度，将所得菌悬液加入至样品检测池，利用显微镜找到溶液中的细胞，用激光照射细胞并获得该细胞的拉曼光谱，对所得拉曼光谱数据进行背景去除、光滑处理、基线校准和归一化处理，检测拉曼光谱特征峰，若细胞的拉曼光谱中存在1210cmsupgt;‑1/supgt;和1507cmsupgt;‑1/supgt;的拉曼标识峰，则判定待测活体细胞中含有麦角硫因，反之，则判定待测活体细胞中不含麦角硫因。本发明的方法样品准备简单，需样量少，无需细胞破损，检测时间短，可以实现单个活细胞中麦角硫因的检测。

技术领域

本发明属于生物化学技术和分析化学领域，具体涉及一种快速无损检测细胞中麦角硫因的方法。

背景技术

麦角硫因(Ergothioneine,EGT)分子式为C₉H₁₅N₃O₂S，分子量为229.3，易溶于水，不易分解，是一种稀有的天然手性氨基酸。麦角硫因是一种安全、无毒的天然抗氧化剂，具有缓解炎症、清除自由基、解毒、维持DNA的生物合成、细胞的正常生长及细胞免疫等多种生理功能。在器官移植、细胞保存、食品饮料、化妆品、动物饲料等领域具有广泛的用途和市场前景。已知天然的麦角硫因主要由放线菌、蓝细菌和蘑菇等有限的微生物类群产生(Hanetal.,2021)。动物和人体内肠道虽然具有微生物菌群，但目前尚无确切证据表明肠道微生物能够合成麦角硫因，动物或人体的红细胞、骨髓、肝脏、肾等组织中的麦角硫因通过外源摄取和积累获得(CheahandHalliwell2021；Eyetal.,2007)。据报道，在一些病原菌中，例如伯克氏菌(Burkholderia)(Gamage etal.,2018)、结核分枝杆菌(Mycobacteriatuberculosis)(Cummingetal.,2018)和烟曲霉菌(Aspergillusfumigatus)(Sheridanetal.,2016)也能够合成麦角硫因，用于抵抗宿主防御或增强对抗生素的耐药性(CheahandHalliwell2021)。通过化学合成法和生物合成法两种方法获取麦角硫因。其中生物合成具有发酵周期短、产率高、成本低等优点(陈佳敏etal.,2022)。目前，通过大肠杆菌、酿酒酵母、曲霉等基因重组微生物可以发酵生产麦角硫因。