[发明专利]一种食品中嘌呤的分离及含量检测方法

说明书

本发明属于食品检测技术领域，具体涉及一种食品中嘌呤的分离及含量检测方法。该分离方法包括：使用液相色谱方法进行洗脱分离，洗脱分离的流动相包括9mM‑11mM甲酸铵溶液和乙腈，甲酸铵溶液和乙腈的体积比为(40‑55)：(45‑60)；其中，嘌呤包括腺嘌呤、鸟嘌呤、黄嘌呤和次黄嘌呤中的一种或多种。基于该分离方法，可以在10min内完成食品中嘌呤的分离及含量检测。

技术领域

本发明属于食品检测技术领域，具体涉及一种食品中嘌呤的分离及含量检测方法。

背景技术

随着我国经济不断发展，高嘌呤含量食物也逐渐受到人们的喜爱，与此同时造成的就是高尿酸血症引发的健康问题逐步凸显。比如，大豆是人们日常膳食结构中不可或缺的重要部分，其富含8种人体必需氨基酸，具有动物蛋白不可比拟的功能特性，同时具有多种保健成分，对减肥和心脑血管疾病都有积极作用。但是大豆作为高蛋白的植物性食品嘌呤含量较高，比如传统的大豆制品，包括豆粉、豆浆、腐竹等产品，均不适于痛风病人食用(嘌呤是构成体内核酸的重要碱基化合物，其在体内的代谢终产物为尿酸，当体内尿酸沉积时，易引发高尿酸血症和痛风)，这一缺点制约着大豆制品的应用。

在日本，高尿酸血症患者每日嘌呤摄入量限制为400mg；急性和慢性痛风患者每天嘌呤摄入量应控制在150mg以下；对中国居民每日膳食嘌呤平均摄入量的评估表明，我国居民膳食嘌呤的摄入量远高于痛风病人急性期和慢性期嘌呤摄入量应控制在150mg的限制。由此可见，测定食品中嘌呤的含量，为人们饮食提供科学指导，为痛风以及潜在痛风患者提供必要蛋白质的同时，控制嘌呤的摄入，维护身体健康，推动大豆蛋白产品的社会接受程度及健康饮食的发展具有重要意义。

现有食品中嘌呤含量的检测方法包括气相色谱法、离子交换色谱法、薄层色谱法、毛细管电泳法、纸电泳法、高效液相色谱法、液质联用法和嘌呤转化法等。然而，无论是哪一种检测方式，都或多或少存在缺陷。比如，气相色谱法存在需要衍生化、操作条件苛刻，定性能力较弱的缺陷；离子交换色谱法存在样品分析流速低、温度高、耗时长的缺陷；薄层色谱法存在不能用腐蚀性显色剂，分离效果不理想的缺陷；毛细管电泳法存在操作流程复杂，影响因素多；纸电泳法存在该方法仅限于测定香菇中特有的香菇嘌呤，且对样品纯度要求较高，操作繁琐的缺陷；嘌呤转化法存在操作步骤繁琐，转化条件严格，中间环节会损失部分嘌呤，定量不准确的缺陷。另外，高效液相色谱法HPLC法和液质联用法时目前比较常用的步骤相对简单且分离效果相对好的食品中嘌呤的检测方法，但目前的高效液相色谱法HPLC法和液质联用法存在保留时间长，检测效率低的缺陷。

比如，现有专利CN 108318593 A公开了利用高效液相色谱仪检测食物中的四种嘌呤的方法，先将样品用10％的高氯酸水解预处理后，利用液相色谱分析仪对预处理后的待检测样品进行分析，其中，液相色谱分析仪的流动相包括甲酸铵溶液和甲醇，甲酸铵溶液为0.3～0.4g甲酸铵溶于500mL超纯水中制成，甲酸铵溶液的pH值为3.5～3.59；甲酸铵溶液与甲醇的比例(按体积计)为97～99:3～1，四种嘌呤的保留时间在11min～17min之间，回收率在81％～113％之间。该专利中的检测方法中嘌呤保留时间比较长，不利于快速检测。

因此，研发一种快速检测食品中嘌呤含量的方法具有重大意义。

发明内容

针对以上问题，本发明目的之一在于提供一种食品中嘌呤的分离方法，该分离方法是使用色谱柱进行分离，基于该分离方法，可以与质谱仪联用对嘌呤的含量进行检测，可以在10min将一种或多种嘌呤从大豆食品出分离并准确检测出其含量。

为了达到上述目的，本发明可以采用以下技术方案：

本发明一方面提供一种食品中嘌呤的分离方法，其包括：使用液相色谱方法进行洗脱分离，洗脱分离的流动相包括9mM-11mM甲酸铵溶液和乙腈，甲酸铵溶液和乙腈的体积比为(40-55)：(45-60)；其中，嘌呤包括腺嘌呤、鸟嘌呤、黄嘌呤和次黄嘌呤中的一种或多种。