[发明专利]一种机械分离毛囊干细胞的方法

说明书

本发明属于干细胞领域，具体涉及一种机械分离毛囊干细胞的方法。本发明利用含有白蛋白的组织保护液对毛囊组织进行清洗浸泡，减少机械损伤对细胞带来的伤害，更好的维持细胞活性。本发明通过机械分离法制备的毛囊干细胞数量较多，细胞活性高，有效避免了酶、培养基等外源物质对细胞造成细胞表面标志物和分化潜能的改变，保持了干细胞在组织微环境中的原始生态位和功能。本发明通过机械分离法分离组织细胞，被认定为体外最低限度的操作，不被定义为药品，在临床使用条件上没有生物制剂药品的诸多限制，操作简便，无需进行体外扩增培养，高效省时，具有很好的临床应用前景。

技术领域

本发明属于干细胞领域，具体涉及一种机械分离毛囊干细胞的方法。

背景技术

雄性激素脱发是当今人们常遇的疾病，给人们在生理和心理上带来很大困扰。目前药物治疗雄性激素脱发常用的合法治疗手段包括使用米诺地尔和非那雄胺治疗，虽然有一定的治疗效果，但需要持续、无限期的使用以保持头发密度，此外还会造成多毛症、性功能障碍等问题。而利用干细胞治疗雄性激素脱发也是作用非常显著的手段，其中最适于治疗雄性激素脱发的是毛囊干细胞。头发毛囊中含有大量干细胞，包括毛囊间充质干细胞和毛囊上皮干细胞，可以分化成为毛囊间表皮、毛囊结构和皮脂腺，重建成新的毛囊，促进头发增长。因毛囊干细胞来源于毛囊，用于治疗脱发具有同源性且其为非常容易获得的自体干细胞来源，数量丰富，对患者无创，逐渐引起国内外研究者的关注。

目前分离制备人类毛囊干细胞主要是通过酶解消化(胶原酶或胰蛋白酶)分离并进行体外增殖培养的方法获取，虽能获取较多数量干细胞，但培养周期较长。此外，在体外对组织和细胞进行酶解和增殖培养等操作，在欧洲和美国等国家和区域不被认为是最低限度的操作。此方法获取的细胞被认定为“生物工艺工程”产品，被定义为一种药品，在临床应用的程序较为复杂，受到很大限制。因此，研发出一种分离毛囊干细胞的方法，以实现在体外对组织进行最低限度的操作，避免引起细胞刺激、增殖，避免改变细胞表型和分化潜能，同时保持干细胞在组织环境中的原始功能，成为了本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

本发明是为了克服现有技术中的分离毛囊干细胞的方法难以适用于临床应用，分离操作复杂、耗时长、效率低且容易引起细胞刺激、增殖，影响细胞活性和生理功能的缺陷，提供了一种机械分离毛囊干细胞的方法。

为实现上述发明目的，本发明通过以下技术方案实现：

一种机械分离毛囊干细胞的方法，包括以下步骤：

(S.1)从皮肤样本取出毛囊组织，加入组织保护液进行清洗；

(S.2)取步骤(S.1)中清洗后的毛囊组织浸泡在组织保护液内并进行剪切，除去清洗后的毛囊组织的皮下脂肪及杂物，得到毛囊组织块；

(S.3)取步骤(S.2)中得到的毛囊组织块进行机械分离，加入组织保护液混匀；然后离心，去除上清，得到毛囊干细胞沉淀；加入复方电解质液重悬毛囊干细胞沉淀，收集得到毛囊干细胞悬液；

所述步骤(S.2)以及步骤(S.3)中的组织保护液中包含有白蛋白。

常见的对采集的毛囊组织进行清洗大多数使用生理盐水或75％乙醇溶液，虽起到了消毒杀菌的作用，但盐水或75％乙醇溶液容易对毛囊造成损伤，致使毛囊坏死。本发明人发现，利用含有白蛋白的组织保护液对毛囊组织进行清洗浸泡，能有效降低其对毛囊的损害。白蛋白(albumin，又称清蛋白)是人体血浆中最主要的蛋白质，由肝实质细胞合成，具有抗氧化功能，用于维持机体营养与渗透压。白蛋白可在体外调节细胞的生理环境，减少机械损伤对细胞带来的伤害，更好的维持细胞活性。