[发明专利]一种高纯度山柰酚3-O-(2″-O-阿哌呋喃基)芸香苷的制备方法

说明书

本发明公开了一种高纯度山柰酚3‑O‑(2”‑O‑阿哌呋喃基)芸香苷的制备方法，步骤如下：药材提取；将提取液进样制备液相色谱仪，以乙腈‑1％冰乙酸为流动相，收集10‑11分钟流出液，得一次制备洗脱液；将得到的洗脱液回收溶剂，残渣用适量甲醇溶解，将所得溶液进样高效液相色谱仪，以乙腈‑1％冰乙酸为流动相，收集5‑7分钟流出液，得二次制备洗脱液；将洗脱液回收溶剂减压干燥得到目标化合物。本发明可将目标化合物从耳叶番泻叶中高效快速有针对性的分离出来，且纯度高(＞98％)、得率是现有方法的123倍。该目标化合物可作为对照品用于番泻叶中掺伪耳叶番泻叶的专属性鉴别，对控制番泻叶药材及其制剂的质量有重要意义。

技术领域

本发明涉及植物提取技术领域，特别涉及一种高纯度山柰酚3-O-(2″-O-阿哌呋喃基)芸香苷的制备方法。

背景技术

耳叶番泻叶(Cassia auriculata L Plant)，又名圆叶番泻叶，为豆科Lesuminosae植物耳叶番泻Cassia auriculataL.的干燥叶，常掺杂于狭叶番泻叶中。番泻叶中的二蒽酮类衍生物番泻苷A、B、C、D的泻下作用及刺激性较其他含蒽醌类的泻药更强，且口服用药毒性很小，临床常用于急性便秘。耳叶番泻叶中二蒽酮类化合物的种类和含量大幅低于番泻叶，掺入过多会影响番泻叶的质量，影响用药的有效性和安全性。所以寻找一种耳叶番泻叶中专属性成分，用于耳叶番泻叶掺伪番泻叶的鉴别具有重要意义。经质谱鉴定，山柰酚3-O-(2″-O-阿哌呋喃基)芸香苷(kaempferol 3-O-(2”-O-apiofuranosyl)rutinoside)(结构式参见式Ⅰ)为耳叶番泻叶中专属性成分，在番泻叶中不含有，但该化合物无市售对照品。

关于kaempferol 3-O-(2”-O-apiofuranosyl)rutinoside的分离纯化技术，目前未见有针对性的分离方法。现有方法一般为传统提取分离方式，且报道较少，往往通过对植物进行广泛提取分离得到该化合物，无目标追踪性，得率极低。较先进的报道之一是采用葡聚糖凝胶柱和半制备液相对其进行分离纯化，其工艺为取0.89kg红瓜Cocciniagrandis(L.)Voigt的叶子，在室温下加入甲醇3.25L，浸渍3天，回收溶剂后得到27.86g粗提取物。取上述粗提物10g，置于Sephadex LH-20柱(4×78cm)上，用甲醇洗脱，得到22个馏分(F1–F22)。进一步使用半制备型C18 HPLC SunFire色谱柱(19×250mm，5.0μm)对上一步中的所有馏分进行分离，从F9和F10馏分中得到3个化合物，其中之一为Kaempferol3-O-β-D-apiofuranosyl-(1→2)-[α-L-rhamnopyranosyl-(1→6)]-β-D-glucopyranoside(即kaempferol 3-O-(2″-O-apiofuranosyl)rutinoside，8.3mg)。该方法步骤较繁琐，采用甲醇浸渍，耗时长且易提取不完全；采用葡聚糖凝胶柱分离，有机溶剂用量大、工作量大且耗时长，对目标成分分离没有明确追踪性。此外，该方法提取效率极低，最后得率仅为0.0026％(得率％＝8.3mg/10g×27.86g/0.89kg×100％＝0.0026％)。

发明内容

本发明为了解决现有的山柰酚3-O-(2″-O-阿哌呋喃基)芸香苷分离纯化方法产率较低，且工艺繁琐的问题，提供了一种高纯度山柰酚3-O-(2″-O-阿哌呋喃基)芸香苷的制备方法，该方法联合使用制备液相色谱仪与高效液相色谱仪，将kaempferol3-O-(2”-O-apiofuranosyl)rutinoside从耳叶番泻叶提取液中分离出来，并且每步回收率高达80％以上，最终得到的kaempferol 3-O-(2”-O-apiofuranosyl)rutinoside纯度较高。

本发明是采用以下技术方案得以实现的。

一种高纯度山柰酚3-O-(2″-O-阿哌呋喃基)芸香苷的制备方法，包括以下步骤：