[发明专利]液相色谱-质谱联用仪测定N-亚硝基伐尼克兰的方法

权利要求书

1.一种液相色谱-质谱联用仪测定酒石酸伐尼克兰片中N-亚硝基伐尼克兰的方法，其特征在于，该方法具体包括如下步骤：

（1）以氟马西尼为内标，取氟马西尼对照品10mg，精密称定，加甲醇溶解并定量稀释制成每1mL中含氟马西尼为100ng的溶液，作为内标工作液；

（2）取N-亚硝基伐尼克兰对照品1 mg，精密称定，用步骤（1）制备的内标工作液溶解并定量稀释成每1mL中含N-亚硝基伐尼克兰为92.5ng的溶液，作为对照品溶液；

（3）精密称取酒石酸伐尼克兰片细粉，含伐尼克兰1.0mg，置具塞离心管中，精密加入步骤（1）制备的内标工作液1mL，超声溶解后，13000转4℃离心10分钟，取上清液，避光操作，作为供试品溶液；

（4）精密量取步骤（2）制备的对照品溶液和步骤（3）制备的供试品溶液，与水1:1混合均匀后，用0.45µm有机滤膜滤过，各取续滤液20µL，分别注入液相色谱-质谱联用仪，记录色谱图。

2. 根据权利要求1所述的一种液相色谱-质谱联用仪测定酒石酸伐尼克兰片中N-亚硝基伐尼克兰的方法，其特征在于，所述步骤（4）中液相色谱-质谱联用仪的色谱测定条件为：色谱柱采用型号为Phenomenex Curosil-PFP，规格150*4.6mm，5μm，或效能相当的色谱柱；用五氟苯基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.1%甲酸水为流动相A，0.1%甲酸甲醇为流动相B，流速1.0mL/min，柱温为30℃，分流比3:7进行质谱检测。

3.根据权利要求2所述的一种液相色谱-质谱联用仪测定酒石酸伐尼克兰片中N-亚硝基伐尼克兰的方法，其特征在于，所述流动相A和流动相B具体按如下程序和比例进行线性梯度洗脱：0min，流动相A:流动相B=90:10；5min，流动相A:流动相B=2:98；8min，流动相A:流动相B=2:98；8.5min，流动相A:流动相B=90:10；13.5min，流动相A:流动相B=90:10。

4.根据权利要求1所述的一种液相色谱-质谱联用仪测定酒石酸伐尼克兰片中N-亚硝基伐尼克兰的方法，其特征在于，所述步骤（4）中液相色谱-质谱联用仪的质谱测定条件为：采用电喷雾正离子化，喷雾电压3500V，鞘气压力35psi，辅助气压力5psi，离子传输毛细管温度350℃，碰撞气氩气压力2mTorr。

5. 根据权利要求1所述的一种液相色谱-质谱联用仪测定酒石酸伐尼克兰片中N-亚硝基伐尼克兰的方法，其特征在于，所述步骤（4）中液相色谱-质谱联用仪的质谱检测过程中，检测离子对MRM检测N-亚硝基伐尼克兰的离子反应是241.1@17→211.1；检测内标氟马西尼的离子反应是304.1@ 17→258.1。

6.根据权利要求1所述的一种液相色谱-质谱联用仪测定酒石酸伐尼克兰片中N-亚硝基伐尼克兰的方法，其特征在于，所述步骤（4）中记录色谱图的具体操作过程如下：精密量取对照品溶液20µL作为系统适用性溶液，注入液相色谱-质谱联用仪中进行测定，记录色谱图，根据色谱图中峰面积数据计算N-亚硝基伐尼克兰与内标峰的面积比；再精密量取供试品溶液20µL注入液相色谱-质谱联用仪中进行测定，记录供试品色谱图，根据供试品色谱图的情况，以内标法对照溶液的峰面积比为参照，计算供试品中N-亚硝基伐尼克兰的含量。

7.根据权利要求6所述的一种液相色谱-质谱联用仪测定酒石酸伐尼克兰片中N-亚硝基伐尼克兰的方法，其特征在于，所述步骤（4）测得的供试品溶液色谱图中如显N-亚硝基伐尼克兰峰，N-亚硝基伐尼克兰与内标峰面积的比，不得大于对照品溶液相应峰面积的比。