[发明专利]液相色谱-质谱联用仪测定N-亚硝基伐尼克兰的方法

说明书

本发明提出的是一种液相色谱‑质谱联用仪测定酒石酸伐尼克兰片中N‑亚硝基伐尼克兰的方法，取氟马西尼配制成内标工作液，取N‑亚硝基伐尼克兰和内标工作液配制成对照品溶液，再取待测酒石酸伐尼克兰片细粉和内标工作液配制成供试品溶液，分别注入液相色谱‑质谱联用仪，记录色谱图，照内标法按峰面积比计算供试品中N‑亚硝基伐尼克兰的含量。本发明能够有效测定酒石酸伐尼克兰片中N‑亚硝基伐尼克兰的含量，为控制酒石酸伐尼克兰片的质量建立了严格的标准，提升产品的基因毒性杂质控制水平，对于工业化生产中控制酒石酸伐尼克兰片的质量控制有至关重要的作用，可降低生产成本，减少副反应发生的可能性，增加产品竞争力。

技术领域

本发明涉及的是酒石酸伐尼克兰片的质量控制方法，具体涉及一种液相-质谱联用仪测定酒石酸伐尼克兰片中 N-亚硝基伐尼克兰的方法，属于医药分析技术领域。

背景技术

酒石酸伐尼克兰是临床戒烟药，其药理作用为伐尼克兰选择性的与α4β2尼古丁乙酰胆碱受体结合，与该受体具有高度亲和力。伐尼克兰与α4β2尼古丁乙酰胆碱受体亚型结合产生激动作用，同时阻断尼古丁与该受体结合，这是伐尼克兰发挥戒烟作用的机制。 N-亚硝基伐尼克兰为制剂中的亚硝胺杂质（基毒杂质），伐尼克兰是仲胺，文献及研究均明确 N-亚硝基伐尼克兰杂质由伐尼克兰与亚硝酸盐发生亚硝化反应生成，近年来美国FDA经过研究和专家评估，同时考虑到市场对戒烟药的可及性，应控制其限度。

现有酒石酸伐尼克兰的分析方法中对于酒石酸伐尼克兰片中 N-亚硝基伐尼克兰的质量控制并无相应检测和控制手段，急需一种能够精确测定酒石酸伐尼克兰片中 N-亚硝基伐尼克兰含量的方法，以实现对酒石酸伐尼克兰片的质量控制，提高酒石酸伐尼克兰片产品的整体质量。

发明内容

本发明的目的在于填补上述现有技术中针对 N-亚硝基伐尼克兰杂质的检测方法存在的空白，建立一种适用于酒石酸伐尼克兰片中 N-亚硝基伐尼克兰含量检测与限度控制的方法。

本发明的技术解决方案：一种以反相高效液相色谱梯度洗脱分离 N-亚硝基伐尼克兰、氟马西尼为内标、串联质谱MRM进行检测的酒石酸伐尼克兰片中 N-亚硝基伐尼克兰的测定方法，具体包括如下步骤：

（1）内标工作液的制备：取氟马西尼约10mg，精密称定，置100 mL量瓶中，以甲醇为溶剂溶解，定容至刻度，摇匀作为储备液。取储备液适量，用甲醇逐级定量稀释制成氟马西尼浓度为100ng/ml内标工作液；

（2）对照品溶液的制备：取 N-亚硝基伐尼克兰对照品约1 mg，精密称定，置10mL量瓶中，以内标工作液为溶剂溶解，定容至刻度，摇匀作为对照品储备液；精密量取该溶液适量，用内标工作液定量稀释成每1ml中含 N-亚硝基伐尼克兰为92.5ng的溶液作为对照品溶液（系统适用性溶液）；

（3）供试品溶液的制备：取各批次供试品细粉适量（含酒石酸伐尼克兰约为1.0mg），精密称定，分别置于2mL离心管中，各精密加入内标工作液1mL。超声20分钟使API溶解后，13000转4℃离心10分钟，取上清液，避光操作，作为供试品溶液；