[发明专利]一种用于检测神经梅毒的融合蛋白及其试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测神经梅毒的融合蛋白，其特征在于，为表达Nichols Houston株TP0136抗原基因片段和生物发光报告基因的融合蛋白；所述Nichols Houston株TP0136抗原基因片段为Genbank ID:3322413的Gene组序列位于： Start:156807 Stop:158276的片段，GeneLength:1470； 所述Nichols Houston株TP0136抗原基因片段以梅毒螺旋体NicholsHouston株DNA为序列模板，以Nichols Houston株TP0136为引物得到。

2.根据权利要求1所述的一种用于检测神经梅毒的融合蛋白，其特征在于，所述序列模板SEQ01：Nichols Houston株TP0136抗原基因片段序列的16位到1470位；上游引物SEQ02：5'- ATGACGTGCGATTTCACTGG -3'，下游引物SEQ03：5'- CTCGCGGTTCCAGGAGCACG -3'。

3.根据权利要求1所述的一种用于检测神经梅毒的融合蛋白，其特征在于，所述生物发光报告基因为：荧光素酶报告基因。

4.根据权利要求3所述的一种用于检测神经梅毒的融合蛋白，其特征在于，所述荧光素酶报告基因为：双荧光素酶报告基因。

5.根据权利要求1所述的一种用于检测神经梅毒的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白由Nichols Houston株TP0136抗原基因片段和NanoLuc荧光素酶基因的pNLF1载体质粒分别进行酶切、连接得到的重组质粒通过表达得到的融合蛋白。

6.根据权利要求5所述的一种用于检测神经梅毒的融合蛋白，其特征在于，所述酶切采用Eco RⅠ和 XbaⅠ双酶切，所述连接酶为T4连接酶。

7.根据权利要求5所述的一种用于检测神经梅毒的融合蛋白，其特征在于，所述表达的方法为：

1）重组质粒转化到E.coli DH5α 感受态细胞，孵育、接种培养、PCR鉴定、序列测定；

2）使用脂质体介导法将重组质粒进行细胞转染；

3）将转染后的细胞经过细胞裂解后，收集上清液稀释得到融合蛋白。

8.一种用于检测神经梅毒的融合蛋白试剂盒，其特征在于，包括：(1)样本稀释液；(2)NanoLuc荧光素酶和梅毒螺旋体Nichols Houston株TP0136抗原组成的融合蛋白液(3)proteinA/G包被的酶标板；(4)洗涤液；(5)荧光素酶底物。

9.根据权利要求8所述的一种用于检测神经梅毒的融合蛋白试剂盒，其特征在于，所述梅毒螺旋体Nichols Houston株TP0136抗原的提取通过将梅毒螺旋体Nichols Houston株接种于 3 月龄新西兰兔睾丸，再将睾丸组织样本用DNA提取试剂盒进行基因组提取得到。

10.根据权利要求8所述的一种用于检测神经梅毒的融合蛋白试剂盒，其特征在于，所述样本稀释液为2%脱脂牛奶。

11.根据权利要求8所述的一种用于检测神经梅毒的融合蛋白试剂盒，其特征在于，所述洗涤液的配方为：NaCl 8g，KCl 0.2g，Na₂HPO₄·12H₂O 3.63g，KH₂PO₄ 0.24g，加水定容至1L。

12.根据权利要求8所述的一种用于检测神经梅毒的融合蛋白试剂盒，其特征在于，所述荧光素酶底物为Promega公司的furimazine荧光素酶底物。