[发明专利]一种用于检测神经梅毒的融合蛋白及其试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于检测神经梅毒的融合蛋白及其试剂盒；本发明意外的发现检测Nichols Houston株TP0136抗体水平用于神经梅毒诊断，弥补了神经梅毒诊断检测方法的空白；通过利用分子生物学基因克隆表达技术，获得梅毒Nichols Houston株TP0136重组蛋白，建立检测Nichols Houston株TP0136抗体的荧光素酶免疫共沉淀方法，并组装成试剂盒；这样的试剂盒具有灵敏度高，和预测准确度高这样意想不到的技术效果，同时具有检测通量大、操作简单，易于推广的优点。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，特别是一种检测试剂盒。

背景技术

现有的神经梅毒的诊断主要依靠脑脊液的实验室检测。作为神经梅毒脑脊液诊断“金标准”的性病研究实验室试验（venereal disease research laboratory test ,VDRL）的特异性为90%，敏感性仅为50%，因此VDRL阴性无法排除神经梅毒。此外，由于存在生物学假阳性问题（即非梅毒患者出现VDRL阳性），进一步限制该方法在神经梅毒诊断中的应用。而其他常用的脑脊液检测方法，或不敏感、或不特异，因此造成神经梅毒诊断困难、误诊率高。一项回顾性研究显示，脑脊液检测神经梅毒的误诊率高达84.6%（126/149）。因此临床迫切需要一种神经梅毒诊断新方法，从而避免过度腰穿，为神经梅毒的诊治提供一种快速、简便的检测方法。

TP0136蛋白异质性可应用于鉴别TP亚种的潜质，可用于区分TPA、TPE、FB和TEN。TP0136分子分型将有助于进一步完善传统TPA分型方法，为探究基因型别与临床诊断、发展转归及耐药监测提供帮助。

荧光素酶免疫共沉淀系统（luciferase immunoprecipitation system, LIPS）通过在哺乳动物细胞中将荧光素酶与抗原进行融合表达，以测定血清中未知抗体的检测技术。LIPS将抗原与荧光素酶融合表达，血清中抗体与抗原特异性结合，抗体再与大颗粒物质protein A/G plus agarose结合，三者形成复合物，通过分析复合物上的荧光素酶与底物作用时荧光强度，以评估血清中的抗体水平。LIPS系统选择在哺乳动物细胞表达会形成空间构象抗原，可以提高检测效率。同时该系统采用的抗原不需要经过纯化，简化了实验步骤。因此，LIPS系统广泛用于多种自身免疫性疾病和病原体检测。然而LIPS采用单管操作，无法实现高通量检测，实验费时。

本发明需要解决以上技术难题，为神经梅毒的诊治提供一种快速、简便的检测试剂盒。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种用于检测神经梅毒的融合蛋白及其试剂盒；本发明利用分子生物学基因克隆表达技术，获得梅毒Nichols Houston株TP0136重组蛋白，建立检测Nichols Houston株TP0136抗体的荧光素酶免疫共沉淀方法，并组装成试剂盒，基于神经梅毒感染者Nichols Houston株TP0136抗体水平来区分神经梅毒，有利于指导临床合理用药，避免过度腰穿，预测准确度高，灵敏度高的诊断试剂盒。

一种用于检测神经梅毒的融合蛋白，为表达Nichols Houston株TP0136抗原基因片段和生物发光报告基因的融合蛋白；所述Nichols Houston株TP0136抗原基因片段为Genbank ID:3322413的Gene组序列位于： Start:156807 Stop:158276的片段，GeneLength:1470； 所述Nichols Houston株TP0136抗原基因片段以梅毒螺旋体NicholsHouston株DNA为序列模板，以Nichols Houston株TP0136为引物得到。

前述的一种用于检测神经梅毒的融合蛋白，序列模板SEQ01：Nichols Houston株TP0136抗原基因片段序列的16位到1470位；上游引物SEQ02：5'- ATGACGTGCGATTTCACTGG -3'，下游引物SEQ03：5'- CTCGCGGTTCCAGGAGCACG -3'。前述的一种用于检测神经梅毒的融合蛋白，生物发光报告基因为：荧光素酶报告基因。