[发明专利]一种可特异性识别Claudin18.2的嵌合抗原受体及应用其的CAR-NK细胞

说明书

本发明提供一种可特异性识别Claudin18.2的嵌合抗原受体及应用其的CAR‑NK细胞。该嵌合抗原受体包括依次串联的可特异性识别Claudin18.2的单链抗体、跨膜结构域和胞内结构域；可特异性识别Claudin18.2的单链抗体的氨基酸序列如SEQ ID：1所示。本发明提供的可特异性识别Claudin18.2的嵌合抗原受体能够有效激活免疫功能细胞并使免疫功能细胞高效地杀卵巢癌细胞和胃癌细胞。

技术领域

本发明涉及细胞免疫治疗技术领域，具体涉及一种可特异性识别Claudin18.2的嵌合抗原受体及应用其的CAR-NK细胞。

背景技术

恶性肿瘤(如卵巢癌和胃癌等)一直是危害人类健康的主要重大疾病之一，在过去的几十年里，恶性肿瘤的发病率一直在不断地增加。卵巢癌是指生长在女性卵巢上的恶性肿瘤，在我国的发病率仅次于宫颈癌和子宫体癌而列居第三位。2020中国卵巢癌的新发病例数已经超过5.5万例，其中有70％在发现的时候已经是晚期。由于晚期的卵巢癌的临床治疗效果并不理想，治疗后患者的5年生存率仅为39％～46％，年死亡例数高达3.7万例。胃癌则是我国最常见的恶性肿瘤之一，可发生于任何年龄，其发病率位居我国各类肿瘤的首位，严重威胁人民的身体健康。近年来，作为肿瘤的治疗策略之一的肿瘤免疫治疗在临床上取得重大的进展。

嵌合抗原受体(chemical antigen receptor，CAR)是可以识别特定蛋白(抗原)的细胞表面受体，当CAR结构与肿瘤相关抗原抗体融合表达在T细胞的细胞膜表面时，能够赋予T细胞特异性识别对应肿瘤细胞的能力，此时的T细胞为即为常说的CAR-T细胞。CAR-T细胞是通过在T细胞中转入能够靶向特定抗原的嵌合抗原受体得到的，当肿瘤细胞的表面含有该抗原时，通过这种方式得到的CAR-T细胞能够特异性识别并结合肿瘤细胞表面的抗原，对肿瘤细胞具有杀伤作用，进而清除肿瘤细胞以达到肿瘤治疗的目的。

目前，以嵌合抗原受体修饰的T细胞(CAR-T细胞)为代表的新一代免疫治疗技术和药物，在临床上取得了重大进展。虽然以CAR-T细胞在肿瘤的免疫治疗上取得了显著的疗效，但是同时也存在较大的副作用以及安全隐患，如细胞因子风暴、脱靶效应以及严重的过敏性反应等，这将严重限制CAR-T细胞在肿瘤的临床治疗中的应用。

与T细胞的杀伤模式相比，自然杀伤细胞(natural killer cell，NK细胞)的的杀伤模式对抗体亲和力要求更低，并且抗体选择范围更大，同时NK细胞的免疫原性以及对肿瘤的杀伤力均比T细胞高，因此，近年来已逐步考虑采用NK细胞作为CAR的载体细胞。

Claudin18.2(Claudin18亚型2)是位于细胞膜上的一个跨膜蛋白，其由CLDN18基因编码，属于Claudin蛋白家族。在正常情况下，Claudin18.2蛋白在正常组织中表达量极低，而在卵巢癌和胃癌等肿瘤组织中高度过表达，通常与卵巢癌患者、胃癌患者的不良预后和较差的临床治疗结果相关，是一种较为理想的肿瘤治疗靶点。

发明内容

本发明提供一种可特异性识别Claudin18.2的嵌合抗原受体及应用其的CAR-NK细胞，以有效激活免疫功能细胞并使免疫功能细胞高效地杀卵巢癌细胞和胃癌细胞。