[发明专利]一种筛选紧密结合过渡态金属离子的方法

说明书

本发明公开了一种筛选紧密结合过渡态金属离子的方法。还公开了通过所述方法筛选获得的两类结合锌离子的DNA，和一类结合镉离子的DNA。将序列优化截短，得到了结合锌离子的Zn(II)‑MZ1a和Zn(II)‑MZ2a，以及结合镉离子的Cd(II)‑TX1a。Zn(II)‑MZ1a在37℃下1小时内，可以结合大量锌离子，并在变性丙烯酰胺凝胶(dPAGE)上显示63％的条带迁移。Zn(II)‑MZ2a在37℃下1小时内，可以结合大量锌离子，并在dPAGE显示53％的条带迁移。Cd(II)‑TX1a在37℃下1小时内，可以结合大量镉离子，并在dPAGE胶上显示56％的条带迁移。

技术领域

本发明属于生物化学与分子生物学领域，具体涉及一种筛选方法的建立以及通过该方法筛选得到的紧密结合锌离子的DNA和紧密结合镉离子的DNA。

背景技术

金属离子在各类生化反应中都有着重要作用，因此，金属传感是非常重要的研究领域。核酸分子，特别是DNA，具有稳定性好、成本低廉以及带有负电荷等特性。这些特性让DNA成为金属传感的最佳生物材料。通过SELEX技术即指数富集的配体系统计划技术，从随机单链核酸序列库筛选出特异性与靶标物高度亲和的核酸分子，这类核酸分子通常称为适配体。但金属离子由于固相固定困难，所以很难筛选对应的适配体。目前，已经有研究人员通过直接筛选或者变构筛选的方法，获得了特异性结合某些过渡态金属离子(例如锌离子、铅离子和镉离子等)的适配体。但这些适配体的特异性不佳，并且亲和力不强，几乎无法进行后续的应用。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明第一方面提供了一筛选紧密结合过渡态金属离子的适配体DNA的方法，所述方法包括筛选ssDNA片段、洗脱ssDNA和PCR扩增获得步骤。

在某些实施方式中，所述筛选包括将ssDNA文库与含过渡态金属离子的缓冲液孵育，通过dPAGE回收发生条带迁移的ssDNA片段。

在某些实施方式中，所述洗脱包括对dPAGE中发生条带迁移的区域进行胶回收，洗脱，沉降获得特定ssDNA。

在某些实施方式中，所述PCR扩增包括以回收得到的ssDNA作为模板，利用PCR反应进行扩增。

在某些实施方式中，所述过渡态金属离子选自二价锌离子或二价镉离子。

在某些实施方式中，所述PCR反应扩增紧密结合锌离子的DNA的引物如SEQ ID NO：1-2所示，所述PCR反应扩增紧密结合镉离子DNA的引物序列如SEQ ID NO：3-4所示。

本发明第二方面提供了根据本发明第一方面所述的方法获得的紧密结合过渡态金属离子的适配体DNA。

在某些实施方式中，所述适配体DNA包含如SEQ ID NO：5-10所示的核苷酸序列，或包含与SEQ ID NO：5-10具有至少80％，85％，90％，95％，99％同一性且能够紧密结合二价锌离子或二价镉离子的核苷酸序列。

本发明第三方面提供了紧密结合二价锌离子的适配体DNA，所述DNA包含如SEQ IDNO：5-8所示的核苷酸序列，或包含与SEQ ID NO：5-8具有至少80％，85％，90％，95％，99％同一性且能够紧密结合二价锌离子的核苷酸序列。

本发明第四方面提供了紧密结合二价镉离子的适配体DNA，所述DNA包含如SEQ IDNO：9-10所示的核苷酸序列，或包含与SEQ ID NO：9-10具有至少80％，85％，90％，95％，99％同一性且能够紧密结合二价镉离子的核苷酸序列。

本发明第五方面提供了第二、三、四方面所述的适配体DNA联合二价锌在制备诱导细胞凋亡试剂中的应用。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：