[发明专利]一种海洋生物抗菌肽药物提取方法

说明书

本发明涉及抗菌肽提取技术领域，且公开了一种海洋生物抗菌肽药物提取方法，所述提取方法为：首先利用内切酶断裂黄鲫蛋白生成活性肽组份，然后设计合成磷脂功能化改性D101大孔吸附树脂Rpf，包括：磷脂功能化改性D101大孔吸附树脂Rpf‑Ⅰ、Rpf‑Ⅱ、Rpf‑Ⅲ，利用其对黄鲫活性肽中的抗菌肽这一目标组份进行高效筛选，提供一种能够用于提取黄鲫活性肽中抗菌肽组份的可行方法，并且提高了树脂对黄鲫活性肽中抗菌肽这一目标组份的筛选能力。

技术领域

本发明涉及抗菌肽提取技术领域，具体为一种海洋生物抗菌肽药物提取方法。

背景技术

抗菌肽是一类具有抗菌活性的小分子短肽，为宿主天然免疫防御系统的重要组成，具有分子量小、热稳定性高、抗菌谱较广等特点。食物蛋白可以通过反应条件温和、反应过程容易控制的可控酶解作用，释放隐藏于蛋白质分子内部的抗菌片段。

黄卿是我国南海、东海、黄海、渤海等海域常年捕获、产量较大的一种小型海水鱼，其蛋白质含量高达70%，是制备天然抗菌肽的优选原料。

大孔吸附树脂是集吸附和分离为一体的高分子分离材料，但是目前使用的大孔吸附树脂结构比较单一，存在对于目标组份筛分能力差的问题。

发明内容

本发明的目标是设计制备磷脂功能化改性的大孔吸附树脂，利用它对黄鲫活性肽中的抗菌肽这一目标组份进行高效筛选，提供一种能够用于提取黄鲫活性肽中抗菌肽组份的可行方法，具体方案如下：

一种海洋生物抗菌肽药物提取方法，所述提取方法为：首先利用内切酶断裂黄鲫蛋白生成活性肽组份，然后采用磷脂功能化改性D101大孔吸附树脂Rpf筛选出抗菌肽组份，其具体的制备步骤如下：

步骤S1，把活性肽组份配制成活性肽溶液；

步骤S2，称取100mg磷脂功能化改性D101大孔吸附树脂Rpf加入到100mL三角瓶Ⅰ中，向三角瓶Ⅰ中加入活性肽溶液，将其放置在恒温振荡器中震荡，震荡温度为30-40℃、转速为150-200r/min，把磷脂功能化改性D101大孔吸附树脂Rpf从三角瓶Ⅰ中取出之后加入到三角瓶Ⅱ中，向三角瓶Ⅱ中加入磷酸盐缓冲液，在温度30-40℃、转速150-200r/min下震荡，得到黄鲫抗菌肽组份。

优选的，所述磷脂功能化改性D101大孔吸附树脂Rpf的制备方法包括如下步骤：

步骤S1，通过傅克反应以三溴化铝为催化剂、1,4-二(溴甲基)苯为溴甲基化试剂，在D101大孔吸附树脂表面接枝溴甲基官能团制备得到溴甲基化D101大孔吸附树脂：

步骤S2，通过4-乙烯苯甲醛的醛基官能团与甘油磷脂的羟基官能团发生羟醛缩合反应制备得到烯基化磷脂单体Apm；

步骤S3，采用原子转移自由基聚合法，以溴甲基化D101大孔吸附树脂的溴甲基官能团为诱发剂，在树脂表面接枝烯基化磷脂单体Apm，得到磷脂功能化改性D101大孔吸附树脂Rpf。

优选的，所述步骤S2：甘油磷脂为甘油磷脂酰胆碱、甘油磷酸酯中的一种。

优选的，所述磷脂功能化改性D101大孔吸附树脂Rpf为磷脂功能化改性D101大孔吸附树脂Rpf-Ⅰ和/或磷脂功能化改性D101大孔吸附树脂Rpf-Ⅱ。

优选的，所述磷脂功能化改性D101大孔吸附树脂Rpf为磷脂功能化改性D101大孔吸附树脂Rpf-Ⅲ。

优选的，所述内切酶为胃蛋白酶或胰蛋白酶。

优选的，所述磷脂功能化改性D101大孔吸附树脂Rpf可以填充在层析柱中使用。

与现有技术相比，本发明具备以下有益的技术效果：

首先设计合成磷脂功能化改性D101大孔吸附树脂Rpf，包括：磷脂功能化改性D101大孔吸附树脂Rpf-Ⅰ、Rpf-Ⅱ、Rpf-Ⅲ；