[发明专利]一种分离浓缩重组人干扰素α2b复性液的方法

权利要求书

1.一种分离浓缩重组人干扰素α2b复性液的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、获得包涵体：将大肠杆菌表达的重组人干扰素α2b发酵液离心和/或过滤方式获得菌体，加入pH为8.0～9.0的含50～200mM氯化钠的Tris-EDTA缓冲液和溶菌酶，搅拌至粘稠状后置于0～6℃下6～20小时；然后匀浆破菌，收集沉淀即为粗包涵体；

S2、洗涤包涵体：往步骤S1获得的粗包涵体中加入洗涤液1，磁力搅拌1～5小时，收集沉淀1；在沉淀1中加入洗涤液2，磁力搅拌1～5小时，收集沉淀2；在沉淀2中加入洗涤液3，磁力搅拌1～5小时，收集沉淀3；

S3、包涵体变性溶解：往步骤S2收集的沉淀3中加入变性液，置于0～6℃下磁力搅拌4～10小时，离心去沉淀收集变性溶解液；

S4、稀释复性：将复性稀释液1加入步骤S3获得的变性溶解液中得到复性稀释第一步液；将复性稀释第一步液加入复性稀释液2中，搅拌均匀，置于0～6℃下放置1～5天，得复性液；

S5、复性液浓缩：吸附剂前处理；复性液前处理；往前处理后的吸附剂中加入2～3倍吸附剂体积的pH为2～3的水，摇匀后水浴超声10～30min，然后加入前处理后的复性剂，搅拌吸附10～30min，置于0～6℃下放置1～5h，收集沉淀，沉淀倒入布氏漏斗中，抽真空，采用洗脱液1洗脱，流出液不收集，然后用洗脱液2淋洗，收集流出液。

2.根据权利要求1所述的分离浓缩重组人干扰素α2b复性液的方法，其特征在于，步骤S1的匀浆破菌在加压到500～600bar的高压均质机中进行，匀浆2～3次。

3.根据权利要求1所述的分离浓缩重组人干扰素α2b复性液的方法，其特征在于，洗涤液1是pH为8.0～9.0的含0.5～1.0wt％曲拉通X-100、2～3wt％蔗糖和0.15～0.3wt％脱氧胆酸钠的Tris-EDTA缓冲液；洗涤液2是pH为8.0～9.0的含2～3mol/L尿素的磷酸盐缓冲液；洗涤液3是pH为8.0～9.0的磷酸盐缓冲液。

4.根据权利要求1所述的分离浓缩重组人干扰素α2b复性液的方法，其特征在于，步骤S3中，变性液是pH为10～11的含7～8mol/L盐酸胍和10～20mmol/L二硫苏糖醇的磷酸盐缓冲液。

5.根据权利要求1所述的分离浓缩重组人干扰素α2b复性液的方法，其特征在于，复性稀释液1是pH为8.5～9.0的含2～3mol/L盐酸胍的磷酸盐缓冲液；复性稀释液2是pH为8.5～9.0的磷酸盐缓冲液。

6.根据权利要求5所述的分离浓缩重组人干扰素α2b复性液的方法，其特征在于，复性稀释液1的加入量使得复性稀释第一步液中盐酸胍的浓度为3～4mol/L、重组人干扰素α2b的浓度为1～4mg/ml；复性稀释液2的加入量使得复性液中盐酸胍的浓度为0.3～0.4mol/L、重组人干扰素α2b的浓度为0.1～0.4mg/ml。

7.根据权利要求1所述的分离浓缩重组人干扰素α2b复性液的方法，其特征在于，吸附剂为硅胶基质表面键合苯基基团的疏水性填料，孔径为200～400埃，粒径为10～30μm。

8.根据权利要求1所述的分离浓缩重组人干扰素α2b复性液的方法，其特征在于，所述吸附剂前处理包括以下步骤：在吸附剂中加入2～3倍吸附剂体积的80～95％乙醇，摇匀后水浴超声10～30min，倒入布氏漏斗中，抽真空，然后依次采用水、pH为2～3的70～90％乙腈水溶液、pH为2～3的水淋洗，淋洗至流出液pH为2～3，真空抽至水份不流出。

9.根据权利要求1所述的分离浓缩重组人干扰素α2b复性液的方法，其特征在于，所述复性液前处理包括以下步骤：调节复性液的pH为2～3，0～6℃下放置1～5小时。

10.根据权利要求1所述的分离浓缩重组人干扰素α2b复性液的方法，其特征在于，洗脱液1是pH为2～3的水，洗脱液2是pH为2～3的25～35％乙腈水溶液。