[发明专利]一种动物皮张中炭疽杆菌快速检测盒及检测方法在审
申请号: | 202310110117.4 | 申请日: | 2023-02-10 |
公开(公告)号: | CN116240302A | 公开(公告)日: | 2023-06-09 |
发明(设计)人: | 刘辉;何伟荣;解瑞林;张欣;刘活 | 申请(专利权)人: | 茂名海关综合技术服务中心 |
主分类号: | C12Q1/689 | 分类号: | C12Q1/689;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/07 |
代理公司: | 深圳市中科天诚知识产权代理事务所(普通合伙) 44868 | 代理人: | 宋鹏跃 |
地址: | 525000 广*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 动物 皮张 炭疽 杆菌 快速 检测 方法 | ||
1.一种动物皮张中炭疽杆菌快速检测盒,其特征在于,包括壳体,所述壳体内设置有检测反应体系,所述检测反应体系包括MIX预混液、BstDNA聚合酶、引物混合液、显色液、阴性对照物质和阳性对照物质;所述引物混合液包括上游外部引物、上游内部引物、下游外部引物和下游内部引物。
2.根据权利要求1所述一种动物皮张中炭疽杆菌快速检测盒,其特征在于,所述上游外部引物为F3,其碱基序列为5’-ACTAACTTGTCATAGTCAGTGTA-3’;所述上游内部引物为FIP,其碱基序列为5’-ATTGTGGTTCTCTAAGCCGATGGGTGTAATGTGAAGTAACTCG-3’;所述下游外部引物为B3,其碱基序列为5’-TGGGGTGGAATACTAAGGT-3’;所述下游内部引物为BIP,其碱基序列为5’-CACGTAATTCCATTCTTACAGCGGAGCAGATAATACTTGGACGAA-3’。
3.根据权利要求1所述一种动物皮张中炭疽杆菌快速检测盒,其特征在于,所述MIX预混液主要成分为dNTP、Ca2+、Mg2+等。
4.根据权利要求1所述一种动物皮张中炭疽杆菌快速检测盒,其特征在于,所述显色液为SYBR GreenⅠ荧光染料。
5.根据权利要求1所述一种动物皮张中炭疽杆菌快速检测盒,其特征在于,所述阴性对照物质为去离子双蒸水。
6.根据权利要求1所述一种动物皮张中炭疽杆菌快速检测盒,其特征在于,所述阳性对照物质为合成炭疽杆菌质粒。
7.根据权利要求1所述一种动物皮张中炭疽杆菌快速检测盒,其特征在于,所述上游外部引物和所述下游外部引物浓度均为10mol/L。
8.根据权利要求1所述一种动物皮张中炭疽杆菌快速检测盒,其特征在于,所述上游内部引物和所述下游内部引物浓度均为40mol/L。
9.根据权利要求1所述一种动物皮张中炭疽杆菌快速检测盒,其特征在于,所述MIX预混液浓度为2X,所述显色液浓度为10U/L。
10.一种动物皮张中炭疽杆菌快速检测方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤S1,取适量的待检动物皮张于灭菌的烧杯中,加入少量蒸馏水(若为盐渍皮张,先用大量清水洗掉皮张上的盐份),置高压灭菌锅中灭菌20min;
步骤S2,取出灭菌好的皮张,挑取有代表性部位的样品置于5mL均质管中;
步骤S3,加入3mL灭菌生理盐水,均质2min;
步骤S4,取1ml均质液煮沸,离心;
步骤S5,倒掉上清液,加入300μL灭菌生理盐水溶解残渣作为待测样;
步骤S6,将待测样加入检测盒中,置于65℃恒温水浴箱中反应40min;
步骤S7,取出检测盒观察颜色变化判定结果。
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