[发明专利]一种动物皮张中炭疽杆菌快速检测盒及检测方法

说明书

本发明公开了一种动物皮张中炭疽杆菌快速检测盒及检测方法，包括壳体，壳体内设置有检测反应体系，检测反应体系包括MIX预混液、BstDNA聚合酶、引物混合液、显色液、阴性对照物质和阳性对照物质；引物混合液包括上游外部引物、上游内部引物、下游外部引物和下游内部引物；检测过程没有使用昂贵的设备，只需简单的恒温水浴箱，设定在65℃即可；检测操作过程简单，检测速度快，60min即可完成检测；对实验室环境没有特别要求，只需普通的办公室或者码头一线都可以开展检测；检测灵敏度高，检测结果判定方便，只需要通过观察颜色就可以判定；检测成本低，易于推广和使用。

技术领域

本发明涉及动物皮张中炭疽杆菌检疫技术领域，尤其涉及一种动物皮张中炭疽杆菌快速检测盒及检测方法。

背景技术

动物皮张中炭疽杆菌的检测，传统方法使用Ascoli试验方法。该方法存在两方面的缺点：一是检测时间过长，整个检测过程需要耗时2-3天，二是检测灵敏度不足，容易造成漏检。近年来，炭疽杆菌的检测出现了实时荧光PCR法，该方法解决了检测灵敏度不足的问题，但是存在检测仪器昂贵、检测方法对操作者技术要求比较高，不易在基层单位普及的缺点。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种动物皮张中炭疽杆菌快速检测盒及检测方法。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

一种动物皮张中炭疽杆菌快速检测盒，包括壳体，所述壳体内设置有检测反应体系，所述检测反应体系包括MIX预混液、BstDNA聚合酶、引物混合液、显色液、阴性对照物质和阳性对照物质；所述引物混合液包括上游外部引物、上游内部引物、下游外部引物和下游内部引物。

优选的，所述上游外部引物为F3，其碱基序列为5’-ACTAACTTGTCATAGTCAGTGTA-3’；所述上游内部引物为FIP，其碱基序列为5’-ATTGTGGTTCTCTAAGCCGATGGGTGTAATGTGAAGTAACTCG-3’；所述下游外部引物为B3，其碱基序列为5’-TGGGGTGGAATACTAAGGT-3’；所述下游内部引物为BIP，其碱基序列为5’-CACGTAATTCCATTCTTACAGCGGAGCAGATAATACTTGGACGAA-3’。

优选的，所述MIX预混液主要成分为dNTP、Ca2+、Mg2+等。

优选的，所述显色液为SYBR GreenⅠ荧光染料。

优选的，所述阴性对照物质为去离子双蒸水。

优选的，所述阳性对照物质为合成炭疽杆菌质粒。

优选的，所述上游外部引物和所述下游外部引物浓度均为10mol/L。

优选的，所述上游内部引物和所述下游内部引物浓度均为40mol/L。

优选的，所述MIX预混液浓度为2X，所述显色液浓度为10U/L。

一种动物皮张中炭疽杆菌快速检测方法，包括以下步骤：

步骤S1,取适量的待检动物皮张于灭菌的烧杯中，加入少量蒸馏水(若为盐渍皮张，先用大量清水洗掉皮张上的盐份)，置高压灭菌锅中灭菌20min；

步骤S2,取出灭菌好的皮张，挑取有代表性部位的样品置于5mL均质管中；

步骤S3,加入3mL灭菌生理盐水，均质2min；

步骤S4,取1ml均质液煮沸，离心；

步骤S5,倒掉上清液，加入300μL灭菌生理盐水溶解残渣作为待测样；

步骤S6,将待测样加入检测反应体系中，置于65℃恒温水浴箱中反应40min；

步骤S7,取出检测盒观察颜色变化判定结果。