[发明专利]一种利用内生菌防治腐烂病的方法

说明书

本发明涉及梨树腐烂病治疗技术领域，公开了一种利用内生菌防治腐烂病的方法，S1：产紫青霉的制备；S2：制备无菌滤液；S3：制备带毒平板；S4：梨树枝条的选取；S5：用打孔器在枝条打孔，孔深至木质部；S6：处理后将枝条置于培养箱中保湿处理。本发明从梨树腐烂病发病枝条中分离获得一株真菌JK2，经形态学和分子生物学鉴定为青霉属产紫青霉，平板对峙试验显示，该菌株对梨树腐烂病菌具有强烈的抑制活性，抑制率达到95％以上，离体梨树枝条鉴定结果显示，JK2对梨树腐烂病具有良好的防治效果，产紫青霉是一种内生真菌，对环境和人类身体无害，有助于开发生物农药。

技术领域

本发明涉及梨树腐烂病治疗技术领域，具体为一种利用内生菌防治腐烂病的方法。

背景技术

梨是我国最重要的水果之一，在各地区均有栽培。但近年来，我国梨在生产过程中受到多种病害的威胁，其中腐烂病是为害最严重的病害之一。梨树腐烂病是由病原菌Valsapyri引起的一种真菌病害，该病在我国梨主产区发生较为普遍，发病植株通常表现为树皮皮层腐烂，发病严重时引起梨树主干皮层坏死，甚至整株枯死。目前，化学防治仍是防治果树腐烂病最有效的手段之一。但是长期使用化学农药，不仅增加环境对病原菌的选择压力，还会造成环境污染以及食品安全问题。因此，在生产上亟需寻求替代化学防治病害的新方法或新手段。其中，生物防治手段具有安全、低毒、高效等特点，是当前病害防治研究的方向和热点。

利用植物内生菌及其代谢产物防治病害是生物防治的重要举措之一，在生产中已经表现出很好的应用前景。目前，关于梨树腐烂病生物防治有少量研究报道。例如，HASF(heat stable antifungal factor)是从产酶溶杆菌(Lysobacter enzymogenes)中分离鉴定的一种小分子物质，能导致梨树腐烂病菌菌丝体扭曲、顶端肿胀等畸形现象，从而抑制腐烂病菌的生长。但总体而言，当前梨树腐烂病防治的研究大部分集中在化学药剂的筛选和利用，而生物防治有关的研究还很少，可利用的梨树腐烂病菌拮抗菌资源还很有限，仍需进一步的挖掘和研究。

本研究从梨树腐烂病发病枝条中分离获得一株真菌JK2，对梨树腐烂病菌具有强烈的抑制活性，抑制率达到95％以上。将JK2接种梨树枝条或叶片，不会导致病害症状出现，表明JK2不是致病菌株，只是一株内生真菌。结合形态学和分子生物学鉴定结果显示，菌株JK2为青霉属产紫青霉。离体梨树枝条鉴定结果显示，JK2对梨树腐烂病具有良好的防治效果。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利用内生菌防治腐烂病的方法，解决了背景技术中所提出目前生产上防治果树腐烂病主要采用化学防治，如甲基硫菌灵、嘧菌酯和丁丙环唑等农药。但长期、单一使用，势必会带来病原菌抗药性升高的风险。例如，已有报道显示，甘肃省苹果树腐烂病菌对甲基硫菌灵产生了不同水平的抗药性。另外，化学农药残留严重污染环境，破坏生态环境，危及人类健康及生命。随着人们生活水平的不断提高，人们对环境及水果的质量要求越来越高。因此，寻找防治病害的低残留、无污染、易降解的生物农药将是防治病害的方向的问题。

为实现上述目的，本发明首先提供了一种产紫青霉。所述产紫青霉为青霉(Penicillium purpurogenum)，其菌株号为JK2，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.22435，保藏时间为2021年5月26日，保藏单位地址为北京市朝阳区北晨西路1号院3号。

所述产紫青霉的18S rDNA的核苷酸序列含有序列表中序列1所示的DNA分子。

所述产紫青霉的微管蛋白的编码序列含有序列表中序列2所示的DNA分子。

18S rDNA的核苷酸序列：