[发明专利]一种凝胶海绵敷料及其制备方法

权利要求书

1.一种凝胶海绵敷料的制备方法，其特征在于，包括：

S100、制备丝素蛋白溶液；

S200、制备壳聚糖溶液；

S300、制备外泌体；

S400、将所述壳聚糖溶液和丝素蛋白溶液体积比2:3，进行混合，得混合液；调节所述混合液的pH至中性；

将所述混合液注入模具中于-25℃至-18℃冷冻10-15小时，于-75℃至-65℃冷冻4-8小时，再冷冻干燥40-50小时，再真空干燥10-15小时，制得海绵支架；

称量外泌体并用PBS缓冲液浸润溶解；

称量所述海绵支架加入PBS溶解的外泌体，再加入乙酰基五肽和乙酰基六肽，浸润溶胀后制得凝胶海绵敷料-80℃保存。

2.根据权利要求1所述凝胶海绵敷料的制备方法，其特征在于，所述丝素蛋白溶液的浓度为2w/v%-6w/v%。

3.根据权利要求1所述凝胶海绵敷料的制备方法，其特征在于，所述壳聚糖溶液采用1v/v%醋酸溶解壳聚糖，所述壳聚糖溶液的浓度为2w/v%-6w/v%。

4.根据权利要求1所述凝胶海绵敷料的制备方法，其特征在于，所述海绵支架的质量与所述外泌体的体积比为0.169g：0.4-0.6ml。

5.根据权利要求1所述凝胶海绵敷料的制备方法，其特征在于，所述乙酰基五肽和乙酰基六肽的总质量与所述海绵支架的质量比为0.05:0.169。

6.根据权利要求1所述凝胶海绵敷料的制备方法，其特征在于，所述外泌体的制备方法包括：

取3-8代的GMSCs，以2*10⁶/皿的密度接种于15cm的细胞培养皿中，加入含10%FBS，1ｘ双抗的DMEMＤ/F12培养基20ml，在37℃，5%CO₂的条件下培养；

待培养皿中的细胞汇合率达到75-80%后，弃去培养基，15mlPBS清洗，每皿中加入20ml含10%exosomes-free血清DMEMＤ/F12培养基，继续培养48h后收集培养上清；

将细胞用0.25%的胰酶消化后离心，重悬后按1：４传代，继续培养，收集细胞培养上清；

将收集的细胞培养上清在4℃、2000ｇ的条件下离心，收集离心后的上清并用0.22μm的滤膜过滤；

将过滤后的上清置于超滤离心管中，4℃，5000ｇ的条件下离心20min，收集超滤后的液体；

将qEV-外泌体分离柱固定在铁架台上，柱子下方放置15ml离心管，接收废液或者收集分离出的外泌体。

7.权利要求1-6任一所述凝胶海绵敷料的制备方法所制备的凝胶海绵敷料。

8.根据权利要求7所述凝胶海绵敷料，其特征在于，所述凝胶海绵敷料的表面孔径为50-150μm；所述凝胶海绵敷料的内部横切孔径为200-500μm；所述凝胶海绵敷料的厚度为0.5-2mm；凝胶海绵敷料在去离子水中的溶胀率为2110%，在PBS中的溶胀率为1750%，在SBF中的溶胀率为1556%，在FBS中的溶胀率为1440%。

9.一种制备凝胶海绵敷料的组合物，其特征在于，包括：

169重量份海绵支架；

50重量份的乙酰基五肽和乙酰基六肽；

与重量份对应的400-600体积份的外泌体；

所述海绵支架由以下重量份的组合物制成：

3体积份的2w/v%-6w/v%丝素蛋白溶液；

2体积份的2w/v%-6w/v%壳聚糖溶液。

10.根据权利要求9所述制备凝胶海绵敷料的组合物，其特征在于，所述丝素蛋白溶液浓度为4w/v%；所述壳聚糖溶液浓度为2w/v%；所述乙酰基五肽和乙酰基六肽的质量比为1:1。