[发明专利]一种凝胶海绵敷料及其制备方法

说明书

本发明涉及生物材料技术领域，具体涉及一种凝胶海绵敷料及其制备方法，本发明凝胶海绵敷料的制备方法，包括：制备丝素蛋白溶液，制备壳聚糖溶液，制备外泌体，将壳聚糖溶液和丝素蛋白溶液体积比2:3，进行混合，得混合液，调节混合液的pH至中性，将混合液注入模具中于‑25℃至‑18℃冷冻10‑15小时，于‑75℃至‑65℃冷冻4‑8小时，再冷冻干燥40‑50小时，再真空干燥10‑15小时，制得海绵支架，称量外泌体并用PBS缓冲液浸润溶解，称量海绵支架加入PBS溶解的外泌体，再加入乙酰基五肽和乙酰基六肽，浸润溶胀后制得凝胶海绵敷料‑80℃保存；本发明制备的凝胶海绵敷料的表面孔径为50‑150μm，内部横切孔径为200‑500μm，可以加速创面的愈合，特别是在高血糖环境下。

技术领域

本发明涉及生物材料技术领域，具体涉及一种凝胶海绵敷料及其制备方法。

背景技术

外泌体作为一种活细胞分泌的亚细胞成分，广泛参与细胞之间的交流，并可以作为干细胞的旁分泌因子来发挥生物学效应。目前的研究表明多种干细胞来源的外泌体可以促进创面修复与皮肤组织再生，而外泌体对皮肤相关细胞功能的，影响是其中的机制之一，例如外泌体可以促进成纤维细胞、上皮细胞的増殖、迁移、分泌功能等。

此外，对于糖尿病慢性创面而言，由于局部组织高糖、炎症状态等可使相关细胞的增殖、迁移能力、分泌相关蛋白能力受损，创面愈合困难。例如高糖的环境会抑制HSFs的功能，促进细胞的凋亡。

动物研宄表明应用外泌体可以促进创面修复与皮肤再生。目前外泌体的应用方法主要是通过创面周围局部多点注射、尾静脉注射。然而这样的外泌体应用方法也存在缺点，例如尾静脉全身给药的方法可能会造成外泌体的流失、浪费，也可能会对机体的其他部位产生未知影响；无论是尾静脉注射、局部多点注射的方式会造成皮肤的二次创伤，对于糖尿病患者，由于周围神经、血管病变，即使是很小的伤口也有可能发展为难愈性溃疡，增加感染风险，在肢端皮肤尤为严重；周围局部注射不能使外泌体广泛、均匀的接触创面等。因此探索一种简单、无创、有效的外泌体应用方式，不但有助于创面的愈合，也将为外泌体在临床的应用于推广奠定基础。

发明内容

针对上述现有技术的不足，本发明旨在提供一种凝胶海绵敷料及其制备方法，以解决目前对外泌体的给药方式的不足，进一步解决创面愈合困难的问题，进一步解决在高血糖环境中创面愈合困难。

为了解决上述问题，本发明采用了如下的技术方案：

第一方面，本发明提供一种凝胶海绵敷料的制备方法，包括：

S100、制备丝素蛋白溶液；

S200、制备壳聚糖溶液；

S300、制备外泌体；

S400、将所述壳聚糖溶液和丝素蛋白溶液体积比2:3，进行混合，搅拌20-40min，得混合液；调节所述混合液的pH至中性；

将所述混合液注入模具中于-25℃至-18℃冷冻10-15小时，于-75℃至-65℃冷冻4-8小时，再冷冻干燥40-50小时，再真空干燥10-15小时，制得海绵支架；

称量外泌体并用PBS缓冲液浸润溶解；

称量所述海绵支架加入PBS溶解的外泌体，再加入乙酰基五肽和乙酰基六肽，浸润溶胀后制得凝胶海绵敷料-80℃保存。

进一步，所述丝素蛋白溶液的浓度为2w/v%-6w/v%。

进一步，所述壳聚糖溶液采用1（v/v）%醋酸溶解壳聚糖，所述壳聚糖溶液的浓度为2w/v%-6w/v%。

进一步，所述海绵支架的质量与所述外泌体的体积比为0.169g：0.4-0.6ml。

进一步，所述乙酰基五肽和乙酰基六肽的总质量与所述海绵支架的质量比为0.05:0.169。

进一步，所述外泌体的制备方法包括：