[发明专利]一种高效去除新生牛血清内毒素的方法

说明书

本发明公开了一种高效去除新生牛血清内毒素的方法。涉及生物制药技术领域。包括以下步骤：S1备料；S2硅藻土提纯；S3第一次离心；S4第一次过滤；S5聚己内酯微纳米颗粒优化；S6第二次离心；S7第二次过滤。本发明所选硅藻土、聚己内酯纳米颗粒基本无毒或低毒，内毒素吸附后无毒性物质残留，同时通过对硅藻土进行提纯和对聚己内酯微纳米颗粒进行优化，利用更高纯度的硅藻土以及含有白藜芦醇的聚己内酯微纳米颗粒对新生牛血清中的内毒素进行吸附，从而有利于提高内毒素的去除效果，另外硅藻土、聚己内酯微纳米颗粒内毒素吸附效率高，硅藻土成本低、聚己内酯微纳米颗粒可再生利用，使得制备的新生牛血清成本低、经济效益高。

技术领域

本发明涉及生物制药技术领域，更具体的说是涉及一种高效去除新生牛血清内毒素的方法。

背景技术

内毒素是革兰氏阴性菌的菌体中存在的毒性物质的总称，是多种革兰氏阴性菌的细胞壁成分，由菌体裂解后释出，又称之为“热原”。其化学成分有磷脂多糖-蛋白质复合物，其毒性成分主要为类脂质A。内毒素位于细胞壁的最外层、覆盖于细胞壁的黏肽上。各种细菌的内毒素大都具有一定的毒性，可引起发热、微循环障碍、内毒素休克及播散性血管内凝血等。因此，含有内毒素的血清不能用于疫苗的生产，只有去除内毒素、保留血清中的营养成分，才可以使这类血清用于疫苗生产，从而变废为宝，得到充分利用。

在现有新生牛血清生产过程中，由于采血、存放等诸多原因造成细菌污染，会产生大量内毒素超标的血清。

因此，为了充分利用生物资源、减少资源浪费，设计一种高效去除新生牛血清内毒素的工艺是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种高效去除新生牛血清内毒素的方法。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种高效去除新生牛血清内毒素的方法，包括以下步骤：

S1备料：准备新生牛血清，备用；

S2硅藻土提纯：将粗品质硅藻土加水打浆，筛分，去杂，分级，沉降或压滤脱水，干燥，得初级提纯土；将初级提纯土与稀硫酸搅拌均匀，加热，洗涤，固液分离，干燥，即得提纯后的硅藻土，备用；

S3第一次离心：将S2中提纯后的硅藻土加入S1新生牛血清中，吸附内毒素后，离心，取上清液；

S4第一次过滤：将S3中所得上清液过滤，取滤液；

S5聚己内酯微纳米颗粒优化：将白藜芦醇与载体材料聚己内酯混合，制备得负载白藜芦醇的聚己内酯微纳米颗粒；

S6第二次离心：在S4所得的滤液中加入S5所得的聚己内酯微纳米颗粒，静态吸附血清中残余内毒素，待吸附完成后，离心，收集聚己内酯微纳米颗粒，用NaOH溶液处理再生利用，取离心液；

S7第二次过滤：将S6中所得离心液经过分级过滤，得滤液即为内毒素检测合格的新生牛血清。

优选的：S2中，粗品质硅藻土和水的重量比例为1：4～8；之后采用10～20目筛筛分，加入分散剂进行去杂，分散剂选自聚丙烯酰胺、柠檬酸钠、三聚磷酸钠中的任意一种；并采用三级水力旋流器进行分级，在60～80℃下干燥2～3h；之后将初级提纯土与质量百分比16～28％的稀硫酸混合；在180～240℃加热1.5～2.5h；利用蒸馏的方式进行固液分离；之后在60～70℃下干燥。

优选的：S3中，提纯后的硅藻土为新生牛血清重量的1.5～5.5％，提纯后的硅藻土在加入新生牛血清之前用内毒素合格的超纯水浸泡、清洗以及用2～3倍体积的NaCl-PB缓冲液浸泡平衡10～18h；吸附内毒素时在3～7℃环境下吸附26～30h；离心时在-6℃～-1℃、离心力6000N～12000N条件下离心12～18min。

优选的：S4中，过滤：通过0.35～0.55μm滤膜。