[发明专利]一种C14orf78免疫组织化学抗体及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种C14orf78免疫组织化学抗体，其特征在于，所述抗体包括重链可变区和轻链可变区，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；轻链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO.2所示。

2.C14orf78免疫组织化学抗体的重链可变区的编码基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

3.C14orf78免疫组织化学抗体的轻链可变区的编码基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

4.用于扩增C14orf78免疫组织化学抗体的轻链可变区的编码基因的引物，其特征在于，如下：

轻链可变区F：GGTTAGATGACCTAGGAACAGTCAGCACGG；

轻链可变区R：GGACCTTTGTCTCTAACACTCATTCCTGTT。

5.用于扩增C14orf78免疫组织化学抗体的重链可变区的编码基因的引物，其特征在于，如下：

重链可变区F：GCCGTCTCGGATCCSARGTNMAGCTGSAGSAGTC；

重链可变区R：AGAACCACCGCCACCATAGACAGATGGGGGTGTCGTTTTGGC。

6.一种重组质粒，其特征在于，含有C14orf78免疫组织化学抗体的重链可变区或轻链可变区的编码基因，其中，C14orf78免疫组织化学抗体的重链可变区的编码基因核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，C14orf78免疫组织化学抗体的轻链可变区的编码基因核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

7.权利要求1所述C14orf78免疫组织化学抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：选择编码C14orf78的核苷酸序列片段，构建质粒，在原核细胞中表达，并进行C14orf78蛋白表达和制备；

步骤2：采用C14orf78蛋白抗原免疫小鼠，进行抗原性分析：抗原乳化、免疫Balb/c小鼠；对免疫小鼠采血，检测免疫效果并进行ELISA血清滴度分析，融合前加强免疫，骨髓瘤细胞株的复苏、驯化，进行融合前准备；

步骤3：挑选免疫效果理想的小鼠，进行96孔细胞培养板的细胞融合；对细胞融合率进行检测；对母克隆培养上清进行ELISA检测，挑选阳性母克隆并进行免疫组化筛选，挑选免疫组化特异性好的进行上清检测；

步骤4：选择两个阳性亚克隆进行腹水生产准备；提供1个阳性亚克隆细胞株并进行腹水生产和抗体纯化；获得C14orf78免疫组织化学抗体；

步骤3中免疫效果理想的小鼠是指测血时1：1000稀释，连续检测3次，OD值均在1.0以上的小鼠；

步骤3中免疫组化特异性好是指定位明确，背景清晰。

8.权利要求1所述C14orf78免疫组织化学抗体的应用，其特征在于，所述C14orf78免疫组织化学抗体在制备与C14orf78相关的正常细胞和肿瘤细胞鉴别诊断试剂盒中的应用。

9.根据权利要求8所述C14orf78免疫组织化学抗体的应用，其特征在于，选自以下应用中的一种：

所述C14orf78免疫组织化学抗体在制备特异性鉴别诊断甲状腺良恶性的诊断试剂盒中的应用，或，

所述C14orf78免疫组织化学抗体在制备协助鉴别肝细胞和胆管细胞癌，以及协助鉴别胆管腺瘤和胆管细胞癌的诊断试剂盒中的应用，或，

所述C14orf78免疫组织化学抗体在制备特异性鉴别诊断肾脏肿瘤的诊断试剂盒中的应用，或，

所述C14orf78免疫组织化学抗体在制备特异性鉴别诊断软组织肿瘤的诊断试剂盒中的应用。

10.权利要求9所述C14orf78免疫组织化学抗体的应用，其特征在于，所述C14orf78免疫组织化学抗体在制备特异性识别甲状腺乳头状癌和滤泡性腺瘤的诊断试剂盒中的应用。