[发明专利]一种灰楸叶片不定芽诱导及植株再生的方法

权利要求书

1.一种灰楸叶片不定芽诱导及植株再生的方法，其特征在于，其包括如下步骤：

S1、灰楸枝条材料的采集及消毒处理；

S2、消毒处理后的灰楸枝条带腋芽的小段接种到诱导培养基中培养得到分化芽，将分化芽接种增殖培养基进行增殖培养获得不定芽，将增殖得到的不定芽截成带腋芽的茎段，转接到生根培养基生根培养获得无菌苗；

S3、将取无菌苗的叶片作为外植体，接种到诱导愈伤的培养基中，进行愈伤组织的初级诱导，获得初级愈伤组织；

S4、初级愈伤组织转接到分化诱导培养基进行不定芽的诱导培养及植株再生；

S5、将不定芽生根培养出的再生植株置于人工智能气候控制室炼苗后移栽；

在步骤S1中，灰楸枝条材料为在每年的3-5月份采集灰楸未萌动一年生枝条，在温室水培催芽，待萌发芽长10 cm-15cm时采集，去掉叶片和叶柄，只留茎段；

在步骤S3中，诱导愈伤的培养基为MS培养基中含有浓度为0.5-3.0mg/L的6BA、0.01-0.2mg/L的NAA、30 g/L的蔗糖和3g/L的植物凝胶，pH为5.9，每2周换一次培养基；

在步骤S4中，分化诱导培养基为DKW基本培养基中含浓度为3.6-4.0mg/L的 6BA、0-0.15mg/L的NAA、0.4 mg/L ZT、0.01-0.1 mg/L的GA3、30 g/L的蔗糖和3g/L的植物凝胶，其pH为6.0。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤S1中，消毒处理为自来水冲洗30min后，用5%的次氯酸钠浸泡5-6min，无菌水冲洗后在超净台进行二次消毒；用75%的酒精浸泡30s-45s后，用无菌水冲洗4-5次，然后用10%的次氯酸钠消毒5min，无菌水冲洗4-5次。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤S2中，诱导培养基为DKW基本培养基中含有浓度为1.0mg/L的6BA、0.2mg/L的IBA、30 g/L的蔗糖和3g/L的植物凝胶，pH为5.8的培养基；

将分化芽截成0.8-1.2cm的茎段进行增殖培养，增殖培养基培养为DKW基本培养基中含有浓度为1.0-2.0mg/L的6BA、0.1-0.2mg/L的IBA、30 g/L的蔗糖和3g/L的植物凝胶，其pH为5.8；

生根培养基为1/2MS 基本培养基中含有浓度为0.27 mg/L的IBA、0.03 mg/L的NAA、30g/L的蔗糖和3g/L的植物凝胶。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤S3中，取无菌苗的顶端分生组织的第三片叶作为外植体，用无菌解剖刀垂直叶脉横切2-4个伤口；将外植体以叶背接触培养基的方式接种到诱导愈伤的培养基中。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤S4中，不定芽的诱导培养的条件为光照1500-2000lx，光照16h/d，温度25±2℃。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤S4中，待不定芽长到1.5cm，将其转接到生根培养基培养获得完整的再生植株，其中，生根培养基为1/2MS中含有浓度为0.27mg/L的IBA和0.03 mg/L的NAA、30 g/L的蔗糖和3g/L的植物凝胶，其pH为5.8。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤S5中，移栽的基质为泥炭土：珍珠岩：蛭石=4：1：1，多菌灵用量为200g/m³。