[发明专利]增加植物中病毒样颗粒的产率

权利要求书

1.一种在植物中生产病毒样颗粒(VLP)的方法，其包括

a)将第一核酸引入所述植物或所述植物的部分，所述第一核酸包含在所述植物中具有活性且有效连接到编码流感血细胞凝集素(HA)蛋白之核苷酸序列的第一调节区，所述流感HA蛋白选自流感B HA和H3 HA，其中编码所述流感HA蛋白的核苷酸序列：

(i)与选自SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:51和SEQ ID NO:61的序列具有至少70％的序列同一性；

(ii)与选自SEQ ID NO:43和SEQ ID NO:57下划线部分的序列具有至少70％的序列同一性；

(iii)与选自SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:46的序列具有至少70％的序列同一性；或者

其中所述流感HA蛋白氨基酸序列为：

(iv)如SEQ ID NO：41和SEQ ID NO：58中的至少一个所示；

(v)如SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：54和SEQ ID NO：64中的至少一个所示；

(vi)如SEQ ID NO：25和SEQ ID NO：48中的至少一个所示；

b)将第二核酸引入所述植物或所述植物的部分，所述第二核酸包含在所述植物中具有活性且有效连接到编码质子通道蛋白之核苷酸序列的第二调节区，其中所述质子通道蛋白是选自流感A/波多黎各/8/1934或流感A/新喀里多尼亚/20/1999的M2，和/或是M2并且包含质子通道特征序列HXXXW，和

c)将所述植物或所述植物的部分于容许所述核酸表达的条件下培养，从而生产VLP，并且其中所述VLP不包含所述质子通道蛋白。

2.权利要求1的方法，其中所述流感HA蛋白的一个或更多个蛋白水解环已被缺失。

3.权利要求1的方法，其中所述流感B HA来自流感B/布里斯班/60/2008、B/马来西亚/2506/2004或B/威斯康辛/1/2010。

4.权利要求3的方法，其中所述流感B HA蛋白的一个或更多个蛋白水解环已被缺失。

5.权利要求1的方法，其中所述流感H3 HA来自流感A/珀斯/16/2009或来自流感A/维多利亚/361/2011。

6.权利要求1的方法，其中所述第一核酸包含有效连接一个或多于一个豇豆花叶病毒属增强子的第一调节区、编码流感血细胞凝集素(HA)蛋白质的核苷酸序列以及一个或多于一个双生病毒扩增元件，并且将包含编码双生病毒复制酶之核苷酸序列的第三核酸引入所述植物或所述植物的部分。

7.权利要求6的方法，其中所述一个或多于一个豇豆花叶病毒属增强子为豇豆花叶病毒属UTR。

8.权利要求7的方法，其中所述豇豆花叶病毒属UTR为豇豆花叶病毒(CPMV)UTR。

9.权利要求6的方法，其中所述一个或多于一个双生病毒扩增元件选自豆黄矮病毒长基因间区域(BeYDV LIR)和BeYDV短基因间区域(BeYDV SIR)。

10.权利要求1的方法，其中在所述培养步骤(步骤c)中，所述核酸于植物中瞬时表达。

11.权利要求1的方法，其中在所述培养步骤(步骤c)中，所述核酸于植物中稳定表达。

12.权利要求1的方法，还包括下述步骤

d)收获所述植物以及纯化所述VLP。

13.权利要求1的方法，其中所述VLP不包含病毒基质、核心蛋白或通道蛋白。