[发明专利]用于口腔种植体牙龈组织的蛋白酶及制备方法

权利要求书

1.用于口腔种植体牙龈组织的蛋白酶组合物，其特征在于，按重量百分比计，由下述物质组成：基质金属蛋白酶混合液50-60份、丝氨酸蛋白酶混合液15-20份、牙龈蛋白酶K混合液10-15份、果胶酶5-8份、复合稳定剂5-8份和0.025mol/L氯化钙溶液1-3份；

所述基质金属蛋白酶混合液由以下物质组成：MMP-1蛋白、MMP-2蛋白、MMP-3蛋白和DEPC水；

MMP-1蛋白、MMP-2蛋白、MMP-3蛋白和DEPC水的重量份比例为：2:1:1：10；

所述丝氨酸蛋白酶混合液由以下物质组成：丝氨酸蛋白酶抑制因子Spink7、siRNAs和DEPC水，丝氨酸蛋白酶抑制因子Spink7、siRNAs和DEPC水的重量份比例为：3:1:10，siRNAs针对丝氨酸蛋白酶抑制因子Spink7进行靶向基因设计；

所述牙龈蛋白酶K混合液由以下物质组成：牙龈蛋白酶K、十二烷基硫酸钠和纯水，牙龈蛋白酶K、十二烷基硫酸钠和纯水的重量份比例为：5:0.2:10；

所述复合稳定剂是0.1mol/L的聚乙烯醇。

2.根据权利要求1所述的用于口腔种植体牙龈组织的蛋白酶组合物，其特征在于，按重量百分比计，由下述物质组成：基质金属蛋白酶混合液53-55份、丝氨酸蛋白酶混合液18-20份、牙龈蛋白酶K混合液13-15份、果胶酶7-8份、复合稳定剂7-8份和0.025mol/L氯化钙溶液1-2份。

3.根据权利要求2所述的用于口腔种植体牙龈组织的蛋白酶组合物，其特征在于，按重量百分比计，由下述物质组成：基质金属蛋白酶混合液53.5份、丝氨酸蛋白酶混合液16.7份、牙龈蛋白酶K混合液13份、果胶酶7份、复合稳定剂7.5份和0.025mol/L氯化钙溶液2.5份。

4.根据权利要求3所述的用于口腔种植体牙龈组织的蛋白酶组合物，其特征在于，所述丝氨酸蛋白酶混合液的制备方法是：

取Spink7质粒的菌液10mL，“井”字形划线涂在含卡那霉素抗性的LB固体培养板上，37℃培养10-15小时；

挑取单菌落于5mL卡那霉素抗性LB液体培养基中，37℃，300转每分钟摇匀，后室温下静置10-12小时；

取3mL菌液，室温下超高速离心机离心1分钟，弃去上清，加入1ml siRNAs，振荡重悬沉淀，向留有菌体沉淀的离心管中加入10mL DEPC水，反复颠倒2-3次轻轻混匀备用。

5.用于口腔牙龈组织的蛋白酶组合物制备方法，其特征在于：采用权利要求1-4任一所述的用于口腔种植体牙龈组织的蛋白酶组合物组分进行制备，具体步骤是：

步骤1，制备基质金属蛋白酶混合液，分别取重量份比例为：2:1:1：10的MMP-1蛋白、MMP-2蛋白、MMP-3蛋白和DEPC水，于37℃下低速离心机以4000转每分的速度离心30秒；37℃下静置5-10分钟，于37℃下低速离心机以8000转每分的速度离心1分钟；

步骤2，制备牙龈蛋白酶K混合液，将10mg十二烷基硫酸钠加入200mg的牙龈蛋白酶K中，放入粉末摇匀器中摇匀1-2分钟，后向均匀混合物中加入400mg纯水，于低速离心机中常温以4000转每分的速度离心2分钟，取出13份溶液备用；

步骤3，取出基质金属蛋白酶混合液53.5份、丝氨酸蛋白酶混合液16.7份和牙龈蛋白酶K混合液13份，37℃下低速离心机200转每分离心5分钟，加入果胶酶7份，继续离心1分钟，最后加入0.1mol/L的聚乙烯醇7.5份和0.025mol/L氯化钙溶液2.5份，低速离心机500转每分离心10分钟得到用于口腔牙龈组织的蛋白酶，取出于超低温冰箱中，2分钟内降至-20℃存储；

步骤4，在制备种植体窝洞前12小时，取出低温存储的用于口腔牙龈组织的蛋白酶，在室温无菌室内放置5小时后，在3小时内均匀加温到37℃，保温2小时装入无菌喷雾器内备用，在牙槽骨上完成种植体窝洞的制备后，在窝洞处先喷涂2-3次，每次1-3ml，后在种植体表面均匀喷涂2-3次，每次1-3ml，后将种植体安装在窝洞即可。