[发明专利]益生工程菌与载药纳米粒杂合子及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种益生工程菌与载药纳米粒杂合子，其特征在于，该杂合子包括益生工程菌以及与所述益生工程菌连接的载药纳米粒，所述益生工程菌包括能够表达PD-L1纳米抗体的编码基因的表达盒和/或能够表达唾液酸酶的编码基因的表达盒，所述载药纳米粒内载有肿瘤化疗药物。

2.根据权利要求1所述的益生工程菌与载药纳米粒杂合子，其特征在于，所述PD-L1纳米抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示或者如SEQ ID NO.2所示；所述唾液酸酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示；

优选地，所述PD-L1纳米抗体的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示或者如SEQIDNO.4所示；所述唾液酸酶的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；

优选地，所述益生工程菌与所述载药纳米粒的重量比为0.01-2：1。

3.根据权利要求1或2所述的益生工程菌与载药纳米粒杂合子，其特征在于，所述益生工程菌由出发菌株经基因工程改造导入能够表达PD-L1纳米抗体的编码基因的表达盒和/或能够表达唾液酸酶的编码基因的表达盒获得，所述出发菌株选自大肠杆菌、酿酒酵母和枯草芽孢杆菌中的至少一种；

优选地，所述出发菌株为大肠杆菌Nissle 1917。

4.根据权利要求1或2所述的益生工程菌与载药纳米粒杂合子，其特征在于，所述载药纳米粒包括所述肿瘤化疗药物以及包载所述肿瘤化疗药物的纳米载体，所述纳米载体选自脂质体、金属有机框架和PLGA中的至少一种；

优选地，所述肿瘤化疗药物为蒽环类药物和/或铂类药物，更优选为阿霉素和/或奥沙利铂；

优选地，所述肿瘤化疗药物与所述纳米载体的重量比为1:2-50。

5.一种益生工程菌与载药纳米粒杂合子的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：在溶剂I中将益生工程菌与载药纳米粒进行混合反应，使得所述益生工程菌与所述载药纳米粒连接；

其中，所述益生工程菌包括能够表达PD-L1纳米抗体的编码基因的表达盒和/或能够表达唾液酸酶的编码基因的表达盒，所述载药纳米粒内载有肿瘤化疗药物。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述PD-L1纳米抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示或者如SEQ ID NO.2所示；所述唾液酸酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示；

优选地，所述所述PD-L1纳米抗体的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示或者如SEQ ID NO.4所示；所述唾液酸酶的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

7.根据权利要求5或6所述的制备方法，其特征在于，所述益生工程菌由出发菌株经基因工程改造导入能够表达PD-L1纳米抗体的编码基因的表达盒和/或能够表达唾液酸酶的编码基因的表达盒获得，所述出发菌株选自大肠杆菌、酿酒酵母和枯草芽孢杆菌中的至少一种；

优选地，所述出发菌株为大肠杆菌Nissle 1917；

优选地，所述载药纳米粒包括所述肿瘤化疗药物以及包载所述肿瘤化疗药物的纳米载体，所述纳米载体选自脂质体、金属有机框架和PLGA中的至少一种；

优选地，所述肿瘤化疗药物为蒽环类药物和/或铂类药物，更优选为阿霉素和/或奥沙利铂；

优选地，所述肿瘤化疗药物与所述纳米载体的重量比为1:2-50。

8.根据权利要求5或6所述的制备方法，其特征在于，所述溶剂I为PBS缓冲液或者水；

优选地，所述益生工程菌与载药纳米粒进行混合反应的过程包括：将所述益生工程菌与一部分所述溶剂I混合形成益生工程菌菌液，将所述载药纳米粒与另一部分所述溶剂I混合形成载药纳米粒溶液，再将所述益生工程菌菌液与所述载药纳米粒溶液混合后搅拌；

优选地，所述溶剂I、所述益生工程菌与所述载药纳米粒的重量比为300-11000:0.01-2:1，所述益生工程菌菌液与所述载药纳米粒溶液的体积比为10-2:1；

优选地，所述搅拌的条件至少包括：温度为5-40℃，时间为1-18h。