[发明专利]益生工程菌与载药纳米粒杂合子及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及生物医药领域，公开了一种益生工程菌与载药纳米粒杂合子及其制备方法和应用。所述杂合子包括益生工程菌以及与所述益生工程菌连接的载药纳米粒，所述益生工程菌包括能够表达PD‑L1纳米抗体的编码基因的表达盒和/或能够表达唾液酸酶的编码基因的表达盒，所述载药纳米粒内载有肿瘤化疗药物；所述杂合子的制备方法包括：在溶剂I中将益生工程菌与载药纳米粒进行混合反应，使得所述益生工程菌与所述载药纳米粒连接。该杂合子能够靶向肿瘤部位，并实现免疫药物和诱导细胞免疫原性死亡的化疗药物联合，提高肿瘤部位的免疫细胞的浸润，增加肿瘤的免疫响应，协同发挥较好的肿瘤杀伤治疗效果。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体地，涉及一种益生工程菌与载药纳米粒杂合子及其制备方法和应用。

背景技术

肿瘤免疫治疗是现今肿瘤治疗领域的热点之一，肿瘤免疫治疗剂主要包括单克隆抗体类免疫检查点抑制剂(如PD-1/PD-L1抑制剂，CTLA-4抑制剂)，治疗性抗体(如抗Her-2单抗、抗EGFR单抗)，癌症疫苗，细胞治疗和小分子抑制剂等，其通过调节肿瘤部位的免疫循环，恢复机体正常的抗肿瘤反应从而实现抗肿瘤作用，为化疗药物耐受，无法进行手术切除的弥散性肿瘤患者提供了良好的治疗策略。

近年来，细菌逐渐走进了肿瘤治疗领域，其灵活的运动性、肿瘤靶向及渗透性、免疫唤醒、侵袭能力和细胞毒性等特征，成为智能精准治疗疾病成为新一代的研究热点。益生菌具有比致病菌显著的安全性优势，近几年受合成生物学的快速发展推动，可合成复杂、多功能的基因线路，使其具备优异的肿瘤特异性位点给药、可持续性释放药物和机制可控治疗等特征，其经重组后可作为一种新型的免疫治疗药物活体载体，对肿瘤微环境进行代谢调节，从而提高免疫疗法的疗效。

尽管新型肿瘤免疫疗法为许多患者带来了希望，但并非所有人都能够响应这类疗法。据了解，实体瘤内抗肿瘤免疫细胞丰度较低是免疫治疗应用受限的重要原因，肿瘤细胞除普通的衰老凋亡坏死之外，还具有免疫原性死亡(immunogenic cell death，ICD)的途径，而蒽环类药物如阿霉素、表阿霉素等，铂类药物如奥沙利铂、顺铂等，均能够引起肿瘤细胞的免疫原性死亡，化疗药物通过启动细胞的免疫原性死亡为免疫细胞的招募提供原始动力，对于增加肿瘤部位免疫细胞的浸润，从而增强免疫检查点抑制剂治疗效果具有非常重要的现实意义。

然而，现有技术中重组菌中免疫治疗药物较为单一，对免疫浸润较少的免疫不敏感性肿瘤效果不佳；此外，现有的蛋白类药物易失活，在肿瘤部位渗透性差，难以实现较好的肿瘤治疗效果。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术存在的问题，提供一种益生工程菌与载药纳米粒杂合子及其制备方法和应用，该杂合子能够靶向肿瘤部位，并实现免疫药物和诱导细胞免疫原性死亡的化疗药物联合，提高肿瘤部位的免疫细胞的浸润，增加肿瘤的免疫响应，协同发挥较好的肿瘤杀伤治疗效果。

为了实现上述目的，本发明第一方面提供一种益生工程菌与载药纳米粒杂合子，该杂合子包括益生工程菌以及与所述益生工程菌连接的载药纳米粒，所述益生工程菌包括能够表达PD-L1纳米抗体的编码基因的表达盒和/或能够表达唾液酸酶的编码基因的表达盒，所述载药纳米粒内载有肿瘤化疗药物。

优选地，所述PD-L1纳米抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示或者如SEQ IDNO.2所示；所述唾液酸酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。

优选地，所述所述PD-L1纳米抗体的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示或者如SEQ ID NO.4所示；所述唾液酸酶的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

优选地，所述益生工程菌与所述载药纳米粒的重量比为0.01-2：1。

优选地，所述益生工程菌由出发菌株经基因工程改造导入能够表达PD-L1纳米抗体的编码基因的表达盒和/或能够表达唾液酸酶的编码基因的表达盒获得，所述出发菌株选自大肠杆菌、酿酒酵母和枯草芽孢杆菌中的至少一种。