[发明专利]一种稳定同位素15

权利要求书

1.一种稳定同位素¹⁵N标记L-异亮氨酸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

选取适用于¹⁵N标记的L-异亮氨酸发酵生产的菌种，所述菌种包括短杆菌属及棒杆菌属的变异株；

配置培养基，对L-异亮氨酸发酵生产的菌种进行发酵培养；

发酵培养结束后，将含有¹⁵N标记L-异亮氨酸的发酵液经离心后采用离子交换法提取分离，发酵液上柱后采用氯化铵溶液进行梯度洗脱得到¹⁵N标记的L-异亮氨酸的单斑洗脱液及其他少量L-丙氨酸-¹⁵N、L-缬氨酸-¹⁵N、L-赖氨酸-¹⁵N₂的单斑洗脱液，分别浓缩后再上柱除盐氨水洗脱，洗脱液经真空浓缩赶氨、脱色，所得滤液再浓缩后用乙醇和水进行结晶，真空烘干，最终得到¹⁵N标记的L-异亮氨酸产品和其他少量L-丙氨酸-¹⁵N、L-缬氨酸-¹⁵N、L-赖氨酸-¹⁵N₂产品。

2.根据权利要求1所述的一种稳定同位素¹⁵N标记L-异亮氨酸的制备方法，其特征在于，所述梯度洗脱时采用氯化铵溶液的浓度为0.02～0.50mol/L。

3.根据权利要求1所述的一种稳定同位素¹⁵N标记L-异亮氨酸的制备方法，其特征在于，所述氯化铵溶液的梯度数为4～8。

4.根据权利要求1所述的一种稳定同位素¹⁵N标记L-异亮氨酸的制备方法，其特征在于，所述真空烘干的温度为50℃～60℃。

5.根据权利要求1所述的一种稳定同位素¹⁵N标记L-异亮氨酸的制备方法，其特征在于，所述菌种选自谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicium)ATCC21799，黄色短杆菌(Brevibacterium flavum)HL41，钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum)AS1.998，天津短杆菌(Brevibacterium tientsienes)T6-13，北京棒杆菌(Corynebacterium pekinense)1.299中的一种。

6.根据权利要求1所述的一种稳定同位素¹⁵N标记L-异亮氨酸的制备方法，其特征在于，所述培养基包括斜面保藏培养基、斜面活化培养基、种子培养基、发酵培养基。

7.根据权利要求1所述的一种稳定同位素¹⁵N标记L-异亮氨酸的制备方法，其特征在于，所述发酵培养基中：

以葡萄糖为碳源，初始配方中葡萄糖浓度为8％～15％；

以铵盐为初始氮源，发酵中以尿素或氨水作为补充氮源；

以柠檬酸钠、生长因子生物素(VH)、盐酸硫胺(VB1)、泛酸钙(VB5)、维生素B12(VB12)作为代谢调节因子；

还添加有无机盐。

8.根据权利要求7所述的一种稳定同位素¹⁵N标记L-异亮氨酸的制备方法，其特征在于，所述铵盐选自硫酸铵、醋酸铵、硝酸铵、氯化铵中的一种或多种；

所述无机盐选自磷酸盐、镁盐、亚铁盐、锰盐中的一种或多种。