[发明专利]一种检测γδT细胞受体多样性的方法

权利要求书

1.一种检测γδT细胞受体多样性的方法，其特征在于，所述的方法包括针对TRG的CDR3区域通过单端锚定PCR和巢式PCR构建测序文库进行测序，其中，所述的巢氏PCR中的第一轮PCR为单端锚定PCR。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的巢式PCR中第二轮PCR的上游的扩增子引物包括P5接头序列、P5测序引物序列、随机碱基序列一和靶基因上游特异性引物序列；优选的，所述的随机碱基序列一长度为1-10bp。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的巢式PCR中第二轮PCR的下游的扩增子引物包括P7接头序列、P7标签序列、P7测序引物序列、随机碱基序列二和靶基因下游特异性引物序列，优选的，所述的随机碱基序列二长度为1-10bp，所述的P7标签序列长度为5-10bp。

4.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于，所述的P5接头序列如SEQ IDNO：2所示，所述的P5测序引物序列如SEQ ID NO：3所示，所述的靶基因上游特异性引物序列如SEQID NO：4所示，所述的P7接头序列如SEQ ID NO：6所示，所述的P7测序引物序列如SEQ IDNO：7所示，所述的靶基因下游特异性引物序列如SEQ ID NO：8所示。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的上游的扩增子引物序列如SEQ IDNO：5所示；所述的下游的扩增子引物序列如SEQ ID NO：9所示；所述的单端锚定PCR引物如SEQ ID NO：1所示。

6.一种γδT细胞受体多样性检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包含第一轮单端锚定PCR引物和第二轮PCR扩增子引物对，

优选的，所述的第二轮PCR的上游的扩增子引物包括P5接头序列、P5测序引物序列、随机碱基序列一和靶基因上游特异性引物序列；

所述的第二轮PCR的下游的扩增子引物包括P7接头序列、P7标签序列、P7测序引物序列、随机碱基序列二和靶基因下游特异性引物序列，

进一步优选的，所述的随机碱基序列一长度为1-10bp，所述的随机碱基序列二长度为1-10bp，所述的P7标签序列长度为5-10bp。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述的上游的扩增子引物序列如SEQ IDNO：5所示；所述的下游的扩增子引物序列如SEQ ID NO：9所示；所述的单端锚定PCR引物如SEQ ID NO：1所示。

8.一种γδT细胞受体多样性检测的引物组合，其特征在于，所述的引物组合包括第一轮单端锚定PCR引物、第二轮PCR扩增子引物对，

优选的，所述的第二轮PCR上游的扩增子引物包括P5接头序列、P5测序引物序列、随机碱基序列一和靶基因上游特异性引物序列；所述的第二轮PCR的下游的扩增子引物包括P7接头序列、P7标签序列、P7测序引物序列、随机碱基序列二和靶基因下游特异性引物序列，

进一步优选的，所述的随机碱基序列一长度为1-10bp，所述的随机碱基序列二长度为1-10bp，所述的P7标签序列长度为5-10bp。

9.根据权利要求8所述的引物组合，其特征在于，所述的上游的扩增子引物序列如SEQID NO：5所示；所述的下游的扩增子引物序列如SEQ ID NO：9所示；所述的单端锚定PCR引物如SEQ ID NO：1所示。

10.提供一种权利要求1-5任一所述的方法、权利要求6-7任一所述的试剂盒或权利要求8-9任一所述的引物组合在评估免疫识别能力或制备治疗肿瘤、自身免疫疾病或感染性疾病药物中的应用。