[发明专利]牡荆素缓解人肠上皮细胞热应激损伤的应用及方法

说明书

本发明涉及的是牡荆素缓解人肠上皮细胞热应激损伤的应用及方法，其中这种牡荆素缓解人肠上皮细胞热应激损伤中应用的方法：一、制备牡荆素溶液：取30mg牡荆素溶于100mL水中，配置成浓度为0.69mg/L的牡荆素溶液；二、当室外温度在37‑43℃时，人在外出前1小时饮用配置好的100mL牡荆素溶液。本发明可有效预防和缓解人体发生热应激，减轻热应激带来的影响。

技术领域：

本发明涉及牡荆素的应用，具体涉及的是牡荆素缓解人肠上皮细胞热应激损伤的应用及方法。

背景技术：

热应激是指当人或动物面临机体无法调节的高温刺激时所产生的非特异性应答反应的总和。近年来热应激已被认为是天气对城市地区的主要影响，它对城市的不利影响涉及到环境、经济、社会以及人类工作效率降低和健康等问题。随着自然环境的恶化，温室效应逐渐加剧，预计热应激情况将会持续增多。

热应激可能会对机体造成不良影响，例如改变肠道通透性，使其肠道屏障发生障碍，降低免疫功能，产生炎症、发生内质网应激和氧化应激等反应。除此之外，热应激还会引起高血压、消化不良、心血管等疾病。在热应激期间，机体各项生理功能受损，体内抗氧化酶活性及表达降低，清除活性氧(ROS)的能力降低，破坏氧化剂和抗氧化剂间的平衡，产生氧化应激，进而影响机体健康。

发明内容：

本发明的目的是牡荆素缓解人肠上皮细胞热应激损伤的应用，这种牡荆素缓解人肠上皮细胞热应激损伤的应用用于解决热应激会使人类工作效率降低和健康受损等问题。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：这种牡荆素缓解人肠上皮细胞热应激损伤的应用包括如下步骤：

步骤一、人肠上皮细胞Caco-2细胞的培养；

步骤二、肠上皮细胞热应激处理；

步骤三、牡荆素对热应激处理前后细胞存活率检验；

步骤四、牡荆素对肠上皮细胞热应激损伤的调控验证。

上述方案中步骤一的具体方法：从液氮罐中取出冻存的人肠上皮细胞Caco-2细胞1mL，放入37℃水浴中复苏，用完全培养基进行培养，将细胞培养在37℃、5％CO₂的培养箱里培养，每隔一天更换培养液或进行传代，细胞长到对数生长期开始试验。

上述方案步骤二的具体方法包括如下步骤：

①用胰蛋白酶消化步骤一中长到对数生长期的人肠上皮细胞，细胞计数后，制成1x10⁴个/mL的细胞悬液，将细胞悬液接种于96孔细胞培养板中，每孔接种100μL，接种2个细胞培养板，放置于37℃、5％CO₂的培养箱中培养；

②待上述步骤中培养的细胞长到80％时，用含1％的胎牛血清的培养基饥饿处理2h，向两板中分别加入0μM、1μM、3μM、30μM、100μM的牡荆素于37℃、5％CO₂的培养箱中培养2h；

③将上述②中的两板细胞分为2组，1板放入43℃、5％CO₂培养箱中高温培养6h，引起热应激反应；另1板继续放在37℃、5％CO₂培养箱培养6h；热应激处理后将2个板放在37℃、5％CO₂培养箱继续培养6h。

上述方案中步骤三的具体方法：向步骤2中的两个96孔板中加入15μLMTT溶液后在37℃、5％CO₂培养箱培养孵育3h，吸出培养液后加入100μLDMSO溶液，避光震荡20min；全波长酶标仪测定各孔在激发波长为490nm处的吸光度OD值，计算每组细胞存活率：

细胞存活率＝试验组OD值/对照组OD值×100％

对照组为未加牡荆素的组，细胞存活率设定为100％。