[发明专利]一种从瑶药六方藤中提取多种单体化合物的方法

权利要求书

1.一种从瑶药六方藤中提取多种单体化合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将六方藤药材粉碎得粗粉，加入药材重量10倍量、体积浓度为75%的乙醇渗漉提取，渗漉流速为3ml/min•kg，合并提取液，减压浓缩，回收溶剂，得到六方藤药材乙醇总提取物；

（2）将乙醇总提取物用水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收溶剂，得石油醚部位浸膏、乙酸乙酯部位浸膏和正丁醇部位浸膏；

（3）石油醚部位分离：

取石油醚部位浸膏，用硅胶柱色谱分离，使用石油醚:乙酸乙酯体积比=100:0→0:1的混合溶剂梯度洗脱，TCL检识，合并相同组分，共获得4个组分，分别记作Fr1、Fr2、Fr3、Fr4；

Fr1组分使用硅胶柱色谱分离，以石油醚-乙酸乙酯体积比=100:0→0:1梯度洗脱，回收溶剂，从第10馏分开始出现大量白色粉末，合并第10-21馏分，丙酮重结晶得到化合物1，经结构鉴定，化合物1为β-谷甾醇；

Fr2组分经硅胶柱色谱分离，以石油醚-乙酸乙酯体积比=100:0→0:1梯度洗脱，回收溶剂，在第15-24流份得化合物2，经结构鉴定，化合物2为豆甾醇；

Fr3组分，经硅胶柱色谱分离，以石油醚-乙酸乙酯体积比=100:0→0:1梯度洗脱，回收溶剂，从第9馏分开始出现白色粉末，TLC检识，合并第9-14馏分，记作Fr3（9-14）；将Fr3（9-14）样品经硅胶柱层析分离，用石油醚:乙酸乙酯体积比=50:1→1:1的混合溶剂依次洗脱，得到化合物3，经结构鉴定，化合物3为二十四烷酸；

Fr4 组分得到白色粉末，经半制备液相色谱分离纯化，得到化合物 4、5、6、7；经结构鉴定，化合物4为豆甾醇乙酸酯，化合物5为白藜芦醇，化合物6为没食子酸，化合物7为岩白菜素；

（4）乙酸乙酯部位分离：

取乙酸乙酯部位浸膏，经硅胶柱色谱分离，采用氯仿:丙酮体积比=100:0→5:1和氯仿-甲醇体积比30:1→0:1，梯度洗脱，收集流份，TCL检识，合并相同流份，共得到15个流份，即组分Fr5- Fr19；

Fr5 用硅胶柱色谱分离，以石油醚-丙酮，体积比15:1→1:1，洗脱，得到白色粉末，反复以硅胶柱色谱分离，经石油醚-丙酮，体积比3:1→1:1，梯度洗脱，得到化合物 8、9；经结构鉴定，化合物8为11-O-没食子酰岩白菜素，化合物9为原儿茶酸；

Fr7 用硅胶柱色谱分离，以石油醚-丙酮，体积比20:1→0:1，梯度洗脱，得到白色粉末，经硅胶柱色谱分离，石油醚-丙酮体积比30:1→0:1梯度洗脱，得到化合物 10和11；经结构鉴定，化合物10为蒲公英赛酮，化合物11为齐敦果酸；

Fr8 用硅胶柱色谱分离，以石油醚-丙酮体积比20:1→0:1梯度洗脱，在石油醚-丙酮，体积比10:1，洗脱部分得到白色细针状物，经氯仿-丙酮体积比1:1反复重结晶得到化合物12；在石油醚-丙酮，体积比15:1，洗脱部分得到白色细针状物，经过 Sephadex LH-20 柱色谱，三氯甲烷-甲醇=1:1，纯化，得到化合物 13、14、15；经结构鉴定，化合物13为高粱酚，化合物14为 β-胡萝卜苷，化合物15为熊果酸；

Fr10用 硅 胶 柱 色 谱 分 离 ， 以 石 油 醚 - 丙 酮 ，体积比100:0→5:1，梯度洗脱，得到白色细针状物，经Sephadex LH-20柱色谱纯化得到化合物16、17、18、19；经结构鉴定，化合物16为芹菜素，化合物17为木犀草素，化合物18为牡荆素，化合物19为山奈酚；

Fr11用硅胶柱色谱分离，以氯仿-甲醇，体积比15:1→0:1，梯度洗脱，得到淡白色细针状物，经过 Sephadex LH-20 柱色谱，三氯甲烷-甲醇=1:1，纯化，得到化合物 20、21；经结构鉴定，化合物20为槲皮素，化合物21为β-香树脂醇；

Fr13用硅胶柱色谱分离，以氯仿-甲醇，体积比15:1→1:1，梯度洗脱，得到白色细针状物，再经过硅胶柱色谱和Sephadex LH-20柱色谱纯化，得到化合物22；经结构鉴定，化合物22为白桦脂酸；

Fr16经硅胶柱色谱，氯仿-甲醇体积比10:1→1:1梯度洗脱和Sephadex LH-20柱色谱，氯仿:甲醇=1:1，分离，重结晶得到化合物23、24；经结构鉴定，化合物23为异绿原酸 A，化合物24为异绿原酸 B；

Fr19经硅胶柱色谱，氯仿-甲醇体积比10:1→1:1，梯度洗脱和Sephadex LH-20柱色谱分离，重结晶得到化合物25；经结构鉴定，化合物25为异绿原酸 C。

2.根据权利要求1所述的从瑶药六方藤中提取多种单体化合物的方法，其特征在于，步骤（3）中Fr4 组分得到白色粉末，经半制备液相色谱分离纯化的色谱条件是： Waters CSHFluoro Phenyl OBD Prep Column，130A，5 μm，10 mm × 250 mm，1/pkg，石油醚-丙酮，3:1。