[发明专利]一种华盖木高效离体培养植株再生方法

权利要求书

1.一种华盖木组培高效离体再生方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)外植体准备：选取刚萌发带芽苞茎段，修剪叶片只保留一段叶柄；

(2)外植体表面消毒；

(3)芽诱导：将消毒好的外植体接入配制好的诱导分化培养基中进行培养；所述诱导分化培养基是在MS基本培养基中添加6-BA0.1~2.0mg/L、IBA0~0.2mg/L、NAA0~0.2mg/L，蔗糖30g/L和琼脂5.6~6.0g/L制备而成，pH值为5.8~6.0；

(4)增殖培养：将诱导培养长1~2cm的腋芽切下转接到增殖培养基中进行增殖培养；所述增殖培养基在改良MS基本培养基中添加6-BA 0.4~0.8mg/L、KT 0.3~0.8mg/L、IBA 0.04~0.08mg/L、蔗糖30g/L和琼脂6.0g/L，反复继代增殖培养扩大繁殖，pH值为5.8；

(5)生根培养：将长≥1.2cm的增殖芽接种至生根培养基中进行生根培养；所述生根培养基在改良MS基本培养基中添加IBA 0~1.0mg/L、NAA 0.4~1.2mg/L、蔗糖15g/L和琼脂5.6~6.0g/L，pH值为5.8~6.0；

所述改良MS基本培养基的配方如下：1520mg/L KNO₃、1280mg/L NH₄NO₃、370mg/L MgSO₄•7H₂O 、170mg/L KH₂PO₄、440mg/L CaCl•2H₂O、200mg/L NH₄Cl、250mg/L Ca(NO₃)₂•2H₂O、80mg/L KCl、6.2mg/L H₃BO₃、8.6mg/L ZnSO₄•7H₂O、22.3mg/LMnSO₄•H₂O、0.25mg/L Na₂MoO₄•2H₂O、0.83mg/L KI、0.025mg/L CuSO₄•5H₂O、0.025mg/L CoCl•6H₂O、27.8mg/L FeSO₄•7H₂O、37.3mg/L Na₂•EDTA•H₂O、100mg/L肌醇、2.0mg/L甘氨酸、0.5mg/L Thiamine•HCl、0.5mg/L烟酸、0.1mg/L维生素B6；其pH值为5.8；

任选还包括下述步骤：

(6)炼苗移栽；

(7)移栽幼苗管理。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)所述外植体准备要求采集枝条前1d至7d用多菌灵溶液对母本植株整株喷洒，降低内生菌。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)所述外植体是取自于20~30年生的实生大树；并且用洗洁精溶液浸泡后，用软刷或棉球轻轻涮洗茎段及叶腋，将刷洗干净的带芽茎段按自然生长方向置于烧杯中，用流水冲洗3~4 h。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)中所述外植体表面消毒是将处理好的带芽茎段用浓度2%次氯酸钠溶液浸泡8min，倒掉次氯酸钠溶液后无菌水冲洗2~3次；再用0.05％~0.1％升汞溶液处理2~5min，最后用无菌水冲洗3~8次。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)中将消毒好的外植体接入配制好的诱导分化培养基中进行培养前，用刀片划开外植体上的芽苞。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（3）和（4）的培养条件为：温度为25±2℃，光照强度为1500~2000lux，光照时间为12h/d的培养室中进行。